人红系终末分化中不同期幼稚细胞的分离和功能研究
红血球的生成，是造血干细胞定向往红细胞发育，成熟的过程，是一个连续而又具有阶段性的过程。血型糖蛋白A的出现表示红系终末分化的开始，细胞从原成红细胞开始向嗜碱性幼红细胞，嗜多色性幼红细胞，正染色幼红细胞增殖分化，最后细胞脱核后变成网织红细胞。网织红细胞经过成熟变成成熟红细胞后通过骨髓进入血液循环系统。 本文建立了一个稳定的模拟红系体内发育的培养体系，并运用蛋白质印迹实验和流式细胞学分析法检测了数十种红系发育相关的膜表面蛋白，骨架蛋白以及跨膜蛋白在培养过程中表达水平的变化。实验结果表明，Band3在发育过程中上升的幅度最为明显而α4integrin，一种粘附分子，先是保持高表达水平，而后降至最低。我们选取了Band3和α4 integrin这两个变化最大的膜蛋白作为标记物，搭配血型糖蛋白A，红系的特异性标记物，对我们的培养体系的分化过程进行了监测，并选取了第7天和第14天的细胞进行流式细胞分选。我们在第7天的细胞中得到了具有形态学特征的原成红细胞，早期嗜碱性幼红细胞，晚期嗜碱性幼红细胞和嗜多色性幼红细胞，我们在第十四天的细胞中得到了具有形态学特征的嗜多色性幼红细胞和正染色幼红细胞，流式细胞分选得到的细胞纯度达到90％以上。为了检测这些细胞是否具有各个期该有的功能，我们对这些细胞进行培养，细胞计数以及做生长曲线，实验结果表明原成红细胞可以分裂4次，早期嗜碱性幼红细胞可以分裂3次，晚期嗜碱性幼红细胞可以分裂2次，嗜多色性幼红细胞可以分裂1次，正染色幼红细胞不能再分裂，这说明我们流式分选得到的各个期的细胞具有了红系终末分化中个幼稚细胞的有丝分裂能力。 我们将这三个标记物运用到正常人的骨髓中，并将人骨髓进行流式细胞分选，我们在正常入骨髓中得到了纯度高达90％以上的各个期的细胞。我们将7个正常人骨髓的有核红细胞进行统计学分析，发现在正常人的骨髓中，我们得到的成原红细胞:早期嗜碱性幼红细胞:晚期嗜碱性幼红细胞:嗜多色性幼红细胞:正染色幼红细胞的比例达到了预测了1∶2∶4∶8∶16。而当我们运用这三个标记物到骨髓异常增生综合症的病人身上时，发现他们骨髓中红系发育终末阶段的情况发生了变化。我们在本研究中发现了建立了稳定的红系体外诱导培养体系，并且发现了红系发育的独特标记物。该标记物的发现能让我们能够得到大量的不同期的红系终末发育的有核红细胞，以便于让我们更深层次的对红细胞的分化和发育进行研究，也让我们可以将不同期的有核红细胞进行RNA测序，DNA测序等方面的分子生物学研究。红系特异性标记物的发现也能让我们将其投入临床应用中，帮助诊断时期专一性的血液疾病以及跟红系发育相关的血液系统疾病例如骨髓衰竭等。
红细胞;幼稚细胞分离技术;RNA测序;DNA测序;红系发育培养体系;骨髓异常增生综合症
中南大学
博士
基础医学
卢光琇;安秀丽
2013
中文
R329.2;R551.3;R457.7
72
2013-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）