金黄色葡萄球菌临床感染特点及耐药机制研究
目的： 1.了解温州医学院附属第一医院2010年1月～2011年12月病房和门诊患者标本中分离的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SAU)的临床分布特点及耐药现状，分析不同来源菌株感染和耐药特性的差异，为临床抗金黄色葡萄球菌药物选择提供依据。 2.研究本院SAU的分子流行病学特征，分别对病房和门诊患者标本中分离的SAU进行耐药基因检测和同源性进行分析，为SAU感染的临床治疗及减少耐药菌株的克隆播散提供依据。 方法： 1.统计分析2010年1月～2011年12月间病房和门诊患者中分离的SAU的标本来源及耐药情况。 2.选取从病房和门诊患者标本中连续分离的SAU207株，其中病房95株，门诊112株，采用聚合酶链反应(PCR)方法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistantst aphylococcus aureus，MRSA)筛查确定mecA基因，氨基糖苷修饰酶基因aac(6’)/aph(2”)、aph(3’-Ⅲ)和ant(4’/4”)，大环内酯类甲基化酶基因ermA、ermC，四环素类核糖体保护蛋白基因tetM、tetO和外排泵蛋白基因tetK、tetL。 3.从病房组和门诊组各挑选多重耐药的SAU14株，通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)对SAU进行同源性分析。 结果： 1.2010年～2011年间温州医学院附属第一医院在临床各类标本中共检出665株SAU，其中来源病房标本菌株385株，来源门诊标本的280株。病房分离的SAU主要来自痰液标本，占所有标本的64％，其次为脓液、创面、尿液和血液等标本，从科室分布来看，病房分离的SAU主要集中于神经内外科和ICU；门诊分离的SAU主要来自精液标本，占所有标本的51%，其次为阴道分泌物、创面、血液等，门诊分离的SAU主要集中在生殖中心和泌尿外科。2010年～2011年间耐MRSA的检出率为56.1%(373株)，其中病房分离的MRSA的检出率为59.7%(230/385)，门诊分离的MRSA的检出率为51.1%(143/280)，病房MRSA的检出率略高于门诊MRSA的检出率。 2.病房分离的385株SAU和门诊分离280株SAU中均未发现万古霉素耐药菌株；青霉素的耐药情况最严重，病房标本的耐药率高达95.8%，门诊标本的耐药率也高达91.4%。两组菌株除对复方新诺明和利福平耐药率较低外，对红霉素、氯洁霉素、四环素、庆大霉素、左旋氧氟沙星和苯唑西林的耐药率仍然较高，如病房SAU对氯洁霉素、四环素、庆大霉素和左旋氧氟沙星的耐药率分别为53.2%、50.6%、53.0%、53.2%，而门诊SAU的耐药率分别为43.6%、29.6%、30.4%、38.2%。可见病房SAU的耐药率明显高于门诊SAU。病房SAU对红霉素的耐药率低于门诊SAU，病房组SAU对红霉素的耐药率为67.3%，门诊组SAU对红霉素的耐药率为75%，但两者对红霉素的耐药率仍然比较高(均大于67%)，其耐药率仅次于青霉素。 3.病房组MRSA对常用抗菌药物的耐药率明显高于门诊组MRSA，如病房组MRSA对庆大霉素、四环素、左旋氧氟沙星、利福平和氯洁霉素的耐药率分别为76.5%、69.6%、79.6%、55.2%、66.1%；而门诊组MRSA对庆大霉素、四环素、左旋氧氟沙星、利福平和氯洁霉素的耐药率分别为43.8%、40.6%、58.7%、36.4%、58.2%。两者对复方新诺明和青霉素的耐药差异不大，对复方新诺明的耐药率分别为23.9%，17.2%；对青霉素的耐药率均为100%。但病房组MRSA对红霉素的耐药率低于门诊组MRSA。病房和门诊两组甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(meticillin-sensitive staphylococcus，MSSA)的耐药情况较为乐观。MSSA对除复方新诺明和万古霉素外的8种抗菌药物耐药率不同程度的低于MRSA，对大多数的抗菌药物的耐药率均在50.0%以下，如复方新诺明、利福平、庆大霉素，左旋氧氟沙星、四环素等药物都有较好的敏感性。病房分离的MSSA和门诊分离的MSSA，对常见抗菌药物的耐药率上未见明显差异。 4.不同来源的SAU mecA的携带率均较高，其中病房组的携带率为63.2%，门诊组的携带率54.5%，病房组略高于门诊组；氨基糖苷类抗菌药物的耐药基因病房组和门诊组都以aac(6’)/aph(2’)耐药基因为主，携带率分别为66.3%和44.6%，病房组明显高于门诊组，aph(3’)-Ⅲ耐药基因病房组高于门诊组，ant(4’/4”)耐药基因门诊组高于病房组，有明显差异；四环素类抗菌药物耐药基因中，病房组只检测到了tetM一种耐药基因，其携带率为53.7%，而门诊组检测到了tetM、tetO、tetK三种耐药基因，其携带率分别为17.9%、0.9%、42.9%，以tetK耐药基因为主。在红霉素类抗菌药物耐药基因中，病房组检测ermA、ermC两种基因的携带率都比较高，分别为53.7%、70.5%，而门诊组检测的ermA的携带率仅为6.6%，而ermC的携带率高达69.6%，可见病房和门诊两组耐药基因的携带率上存在较大的差异。 5.PFGE分析结果显示：28株多重耐药SAU的DNA经XbaI限制性内切酶酶切后电泳，产生12～18条大小不同的片段，大部分片段介于30～500kb之间，通过目测判定各菌株带型之间的关系，采用Tenover等推荐的判断标准，可将14株病房来源SAU分为8种PFGE分型，其中A型2株，A亚型1株，B型2株，B亚型1株，C型2株，D型2株，其他型4株，从病区分布上看，除了B型外，A型的两株都来自于ICU病区，C、D两型都分离自神经内科病区。14株门诊来源的SAU分为11种PFGE分型，A型3株，B型2株，其他型9株，门诊组的A、B两型的菌株来源也比较集中，分别来源于生殖中心和急诊科。在病房和门诊两组标本中未发现具有相同酶切类型的菌株。 结论： 1.我院金黄色葡萄球菌在病房和门诊的临床分布有明显差异，病房分离的SAU以痰液为主，主要集中在神经内外科和ICU，门诊分离的SAU以精液为主，主要分布在生殖中心和泌尿外科，有明显的病区集中趋势；MRSA的检出率高。 2.病房分离的SAU和MRSA对常用抗菌药物的耐药率明显高于门诊分离的SAU和MRSA，而MSSA耐药率差异不明显，门诊菌株对红霉素的耐药率高于病房菌株。未检出万古霉素耐药菌株。 3.我院病房和门诊分离的SAU在mecA、aac(6’)/aph(2”)、aph(3’)-Ⅲ、ant(4’/4”)、ermA、ermC、tetM、tetO、tetK和tetL基因携带率上有明显差异。 4.2010年～2011年间我院病房和门诊两个部门的SAU呈现散发流行趋势，个别病区存在轻微的克隆播散现象。
金黄色葡萄球菌;临床感染;PFGE分型;耐药机制
温州医科大学;温州医学院
硕士
临床检验诊断学
周铁丽
2012
中文
R446.5;R378.11
68
2013-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）