酒石酸锑钾对L-02肝细胞的损伤作用及其机制研究
目的：
在体外试验系统，探讨三价锑化合物～酒石酸锑钾(potassiumantimonyl tartrate，PAT)对L-02肝细胞的毒性影响及其作用机制。
方法：以L-02肝细胞为受试细胞，通过MTT试验检测不同浓度的酒石酸锑钾对L-02肝细胞存活率的影响，选择细胞存活率为40％-90％的浓度进行后续实验。设置5个PAT处理组即100gmol／L、200umol／L、400umol／L、800umol／L、1600umol／L和1个对照组，PAT处理细胞时间为24h。L-02肝细胞的形态学改变和细胞周期的变化分别用HE染色法和流式细胞仪检测分析；PAT对L-02肝细胞膜通透性影响和细胞毒性作用采用乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性水平来评价；PAT诱导L-02肝细胞氧化损伤程度选用超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合成酶(NOS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和一氧化氮(NO)含量等指标评价；用线粒体跨膜电位(△ψm)检测细胞线粒体损伤；用荧光比色法测定细胞内游离钙离子浓度；用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测肝细胞DNA损伤。
结果：
1．PAT引起L-02肝细胞存活率降低：在100-1600umol／LPAT处理浓度，能明显引起L-02肝细胞存活率的降低，且存在着浓度．反应关系，相关系数r=-0.950。
2．PAT引起L-02肝细胞形态学改变：PAT处理24h，引起L-02肝细胞皱缩或肿大，染色质浓染，细胞间隙扩大，随着PAT浓度的增加变化明显，细胞密度也明显减少，细胞膜和核膜不完整或消失，染色质嗜碱性降低。
3．PAT对L-02细胞周期的影响：PAT引起L-02细胞周期发生变化：在100umol／L、200umol／LPAI组，引起S期细胞增加，其中以200umol／LPAT明显高于对照组(P<0.05)；但各PAT处理组，均引起G<,2>期细胞减少，与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。
4．PAT引起细胞膜通透性增加且有细胞毒性作用：PAT引起细胞培养上清液中LDH、AST、ALT活性增加(p<0.05)。
5.PAT所致DNA损伤:PNT能明显诱导细胞DNA的链断裂,剂量越高,DNA断裂程度越严重(p<0.05)。
6.PAT导致L-02细胞氧化损伤:PAT导致细胞内的MDA和NO的含量增加,NOS、SOD活性增强,GSH含量减少(p<0.05)。
7.PAT对线粒体膜电位的影响:用PAT处理的L-02细胞,荧光吸光光度值升高,线粒体膜电位明显降低(p<0.05),且有剂量一反应关系(r=0.962)。
8.PAT对钙稳态的影响:在低剂量处理组,细胞内钙离子浓度降低,400μmol/L及以上剂量,导致细胞内游离钙离子浓度显著增加(p<0.05)。
结论:
PAT在一定浓度下,能引起L-02肝细胞存活率下降,细胞膜通透性增加和细胞周期改变,并诱发DNA损伤,对肝细胞具有明显的损伤作用;其损伤的作用机制可能与PAT导致肝细胞氧化损伤、线粒体崩溃和钙稳态失调等途径有关。
酒石酸锑钾;肝细胞;细胞损伤;氧化损伤;线粒体损伤;钙稳态
中南大学
硕士
卫生毒理学
曾明
2006
中文
R114;R329.2
49
2007-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）