孕妇血浆游离DNA的定量分析及在产前诊断中的应用
本实验拟建立荧光定量PCR检测3一磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因和男性特有Y性别决定区(sexdetermining region Y，SRY)基因的方法；分析孕妇血浆DNA片段长短的分布情况；检测不同孕周孕妇、未孕女性、异常妊娠孕妇血浆中不同来源的游离DNA含量及变化情况；探讨荧光PCR方法在检测胎儿性别等产前诊断中以及孕妇血浆游离DNA的定量分析在唐氏筛查和非创伤性产前诊断中的价值。
材料与方法
1、研究对象：本实验自2004年9月到2005年7月共收集成都市锦江区妇产科医院就诊的孕中期、孕晚期及唐氏高危孕妇共80例外周血标本。其中，孕中期42例，唐氏高危21例，孕晚期17例。5例未孕且无妊娠史的健康女性作为阴性对照，1例正常健康男性作为阳性对照。
2、实验方法：根据GAPDH和SRY序列设计合成特异性引物和探针；提取正常男性外周血细胞DNA，进行目的基因的常规PCR扩增，回收纯化PCR产物，分别将两种PCR产物与T载体连接，转化JM109大肠杆菌中，在LB中培养，提取质粒，经PCR和序列测定等方法鉴定克隆成功后制备成阳性定量标准模板，建立了1个检测GAPDH基因及4个SRY基因的荧光定量PCR方法。两种方法分别检测孕妇血浆中不同来源的DNA片段长度。荧光PCR方法检测未孕女性、孕中期孕妇、唐氏高危孕妇和孕晚期孕妇血浆游离DNA中GAPDH含量和SRY基因的有无及含量变化。统计方法：采用独立样本t检验、单因素方差分析统计方法。
结论
1、荧光定量PCR检测孕妇血浆DNA中GAPDH、SRY具有简便、快速、高灵敏性、高特异性等优点；且闭管操作有效避免了PCR产物的污染；结果用拷贝数表 示，有利于对不同孕期血浆DNA含量变化进行直接的分析和比较。
2、孕妇血浆中胎源性DNA片段长度远小于母源性DNA；异常妊娠及随着孕周的增加使得胎儿DNA在片段长短等理化性质上产生了一定改变；血浆DNA理化性质分析在后续的PCR引物设计和胎儿DNA的富集具有重要的指导意义。
3、孕妇血浆中胎儿游离DNA含量非常低且远少于母源性DNA；由于异常妊娠以及孕周的增加使得胎源性DNA的含量和相对含量都有较大的增加；胎源性DNA的含量及相对含量的改变在一定程度上反应了胎儿的发育情况。
4、孕妇血浆游离DNA的定量分析在进行性别鉴定等无创伤性产前诊断以及判别胎儿发育情况和唐氏筛查中具有重要的临床应用价值。
产前诊断;孕妇;血浆游离DNA;定量分析;荧光定量PCR
四川大学
硕士
遗传学
丁显平
2006
中文
R714.5
73
2007-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）