石蒜组织培养及其生物多样性的ISSR分析
本研究选择西南部分地区及日本的几个石蒜品种，从细胞学和DNA分子角度，分析了它们的遗传多样性水平和遗传结构状况，对红花石蒜和忽地笑的离体繁殖技术进行了初步研究，得出如下结论：
1.进行了红花石蒜和黄花石蒜(忽地笑)双鳞片快速繁殖条件的研究，结果表明：红花石蒜(Lycoris radiate)在16小时800-1200 1x光照下比黑暗条件下出芽率要高：黄花石蒜(Lycoris aurea)在MS+NAA0.2 mg/L+6-BA4mg/L下出芽率为220％，红花石蒜在MS+。NAA0.2 mg/L+6-BA2 mg/L下出芽率为108％；NAA比IBA有利于石蒜生根；硅藻土显著提高黄花石蒜双鳞片出芽率，活性炭起抑制作用；6％蔗糖浓度有利于红花石蒜小鳞茎增重，MS+6-BA4mg/l+NAA0.5mg/L培养基有利于小鳞茎增殖，切割一刀比两刀有利于小鳞茎增殖。
2.对来自西南部分地区和日本的一些石蒜品种进行了核型研究，发现石蒜存在较大的核型变异。四个不同居群的三倍体石蒜虽然染色体数目都是2n=33，但染色体形态上存在些微的差异，其核型分别为：重庆合川(HC)2n=33=3T+30t；四川大学苗圃(CD)2n=33=33t；日本岩国(YG)2n=33=6T+27t：四川峨眉山(EM)2n=33=18st+15t，染色体形态上存在t，T和st的差别。两个不同居群的忽地笑其染色体数目和核型上也有所不同，四川青城山居群核型为2n=14=6m+4T+4t，云南文山居群核型为2n=16=6m+10T。染色体数量均为22的石蒜同样也出现核型上的差别，成都市场购买的两石蒜核型分别为2n=2m+4sm+4st+6t+6T，2n=4st+18t。四川汶川石蒜核型为2n=18=4m+8st+6t，四川都江堰石蒜核型为2n=24=9m+4st+11t，日本(市场购买)石蒜核型为2n=19=4m+2T+3st+10t，三者的核型结构均为首次报道。
3.采用ISSR分子标记技术对实验石蒜居群间和种间共23个样进行了PCR扩增。扩增结果为：从100个引物中筛选的5个引物分别是(CT)8G、(TC)<,8>G、(CT)<,8>RC、(CT)<,8>RG、(CCG)<,6>，除(CCG)<,6>外其共同特征是C和T两个碱基的8个串联重复，说明石蒜属DNA分子中广泛存在着CT或TC的串联重复序列。石蒜9个种间的PCR扩增结果是6个引物(包括引物58R)共得到414条扩增带，每个引物可扩增出19-25条多态性带，平均22条，DNA片断大小分布在200-2500bp之间，其中具有多态性的条带134条，占32％。多样性分析结果为：三倍体石蒜居群间的扩增没有出现特异性条带，表明红花居群间具高度的遗传一致性；其余9个种的扩增电泳图谱经POPGENE软件分析，表明黄花石蒜多样性最高，白花次之，红花石蒜多样性最低；成都市场购买的二倍体红花石蒜(CSl)与日本市场购买的白花石蒜(RS)距离最远，日本广岛的白花石蒜(GD)与四川青城山(QC)距离最近。UPGMA聚类结果显示，9种石蒜被分为2大类：出叶期为春天(CSl)和出叶期为秋天的石蒜(余下8种)各为一类，与形态学观察相一致；除产于四川都江堰石蒜外染色体为22和33的石蒜(染色体长度短，成棒状I型结构)与染色体为14、16、18、19的石蒜(染色体长度较长，成V型和Ⅰ型两型染料结构)能相互分开，以ISSR为基础的UPGMA聚类结果与染色体结构和核型分类的结果基本吻合，说明ISSR可以用于石蒜的分类研究。
石蒜;组织培养;遗传多样性;遗传结构;ISSR分子标记;离体繁殖;核型
四川大学
硕士
遗传学
纳海燕
2006
中文
S682.29;S601
66
2007-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）