重组猪生长激素在毕赤酵母中的表达及其生物活性研究
本研究首先将克隆到的猪生长激素(pGH)基因cDNA编码区片断定向插入pMD-T质粒，转化大肠杆菌JM109，用菌落PCR和质粒PCR方法筛选阳性克隆；以BamHI和EcoRI酶切鉴定重组质粒。将得到质粒用BamH I和EcoRI酶切，胶回收后定向插入pPIC3.5k质粒，重组质粒命名为pPIC3.5k-pGH。pPIC3.5k-pGH。质粒用Sa-I酶切线性化处理后，经电击转化GS115酵母，用MD和MM培养基，筛选重组子，破碎细胞，提取基因组，用PCR的方法进一步鉴定，并用G418抗生素进行拷贝数筛选，以甲醇诱导目标蛋白表达，产物经SDS-PAGE和Western-blot分析，得到高效表达pGH的重组酵母，命名为pPIC3.5k-pGH/GS115，SDS-PAGE和Western-blot分析证明诱导重组酵母表达了pGH蛋白，分子量接近25KDa，与预期的24.4KDa的猪生长激素基因编码蛋白质构成的融合蛋白大小一致。
pPIC3.5k-pGH/GS115酵母经甲醇诱导表达，分别在48,72,96,120小时取样分析，得出最佳的表达条件和时间。从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收正确表达的融合蛋白，对小白鼠用纯化pGH蛋白灌胃)(B组)；同时收集表达酵母菌体，采用灌胃(C组)和自由采食方式(D组)，第7d，14d，2ld，28d称重，试验C组在第三周与对照组之间差异显著(P<0.05)。表明pGH重组酵母对大白鼠具有促生长活性。
猪;生长激素基因;重组酵母;融合蛋白;促生长活性;cDNA
四川大学
硕士
遗传学
刘世贵
2006
中文
Q959.842.03
76
2007-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）