Jembrana病毒反式激活因子Tat结构和功能的研究
JDV在种属上是典型的慢病毒，然而它却能快速发病并导致很高的死亡率。JDVTat不仅能激活自身LTR，还能激活BIV和HIV两种差异明显的LTR，且激活能力甚至强于BIV和HIV自身Tat，目前其多效性的具体机理尚不清楚。本文以JDVTat为材料，在借鉴其他慢病毒Tat已有成果的基础上构建了近150个质粒，对其结构和功能进行了深入研究，试图探索其反式激活机理及其在JDV快速致病中的作用。本文的工作主要包括以下5部分：通过逐步缺失和功能域嵌合对JDVTat的结构域进行了精确的划分，为进一步研究其激活机理奠定基础；与HIV和BIVTat对应结构域进行嵌合，对比各功能域的活性强弱，分析RNA结合能力对反式激活的影响；通过竞争抑制及反义转译试验了解JDVTat激活中可能涉及的细胞因子，利用哺乳动物细胞双杂交系统分析这些细胞因子在转录激活中的作用及其与Tat的关系；结合JDVTat自身结构变化及其与LTR，细胞因子的关系推导其具有多效性的可能原因；确认JDVTat穿越细胞质膜的能力及其对潜伏态病毒和宿主细胞基因表达的影响，推导其在JDV快速发病中的具体作用。
本文首次获得了以下具有理论价值的发现：①精确界定了JDVTat的激活域(15-68aa)和结合域(69-80aa)，证实了各功能域的独立性，并发现N端激活域的主要功能是与CyclinT1相互作用，而C端较强的RNA结合能力是其活性强于HIV和BIVTat的主要原因；②首次发现其N端15个氨基酸是JDVTat通过不同模式激活HIV和BIVLTR的关键，它可能影响CyclinT1相对Tat的空间位置并适应与TAR环区的结合，最终促进整个转录复合物的形成和延伸，融合该段多肽的HIVTat具有类似JDVTat的多效性；③JDVTat借助其关键的精氨酸富集区穿越质膜进入临近细胞并影响胞内潜伏态病毒及某些宿主基因的表达，这一特性可能是促使JDV快速扩张的重要方式。上述发现对全面了解慢病毒的生活周期和基因表达调控，分析病毒发病“快”和“慢”的原因并探索可能的调控方法开辟了新的途径。
Jembrana病毒;反式激活因子;效应元件;细胞因子;蛋白穿膜
南开大学
博士
遗传学
陈启民
2006
中文
S852.6;Q78
126
2007-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）