瘦素mRNA及其蛋白质在酒精性脂肪肝中的表达
为深入研究瘦素(1eptin)在酒精性脂肪肝中的表达，探索其在这种疾病中的发病作用，本研究通过生理方式喂食酒精建立大鼠酒精性脂肪肝模型，并采用分光光度法、ELISA法测定相关酶的活性及利用RT-PCR和免疫组化法检测1eptinmRNA和蛋白在模型中的表达。结果表明：1.通过生理方式喂食酒精建立大鼠酒精性脂肪肝模型，由病理分析可知：酒精组大鼠肝小叶内均出现大量的脂肪变性以及细胞水肿症状(中度以上)，且在汇管区域伴有少量炎细胞浸润和部分点状坏死；酒精组肝系数高于对照组和正常组，说明酒精性脂肪肝模型已建立。
2.应用分光光度法测定血浆中与肝细胞损伤相关酶(AST、ALT)的活性及ELISA法测定血浆中TNF-a和1eptin含量，结果表明：酒精组血浆ALT、AST均高于对照组和正常组；同时酒精组TNF-a和leptin含量也高于对照组和正常组。
3.应用分光光度法测定10％的肝匀浆中的谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量，结果表明：酒精组肝匀浆中GSH和SOD活性逐渐下降，MDA含量却逐渐升高。
4.采用免疫组化法测定酒精组肝组织leptin蛋白分布及表达。免疫组化染色显示：酒精组的枯否氏细胞(KC)呈阳性，主要以核内表达为主，此外少量肝细胞以及汇管区内肝纤维化细胞也呈阳性。
5.通过RT-PCR法检测leptinmRNA在肝组织中的表达，结果显示：酒精组leptinmRNA表达增强，且1eptin/B-actin比值也高于对照组和正常组。
本研究通过生理方式喂食酒精成功建立大鼠酒精性脂肪肝模型，采用分光光度法、ELASE法、免疫组化法和RT-PCR法等方法测定与肝细胞损伤相关的酶、生化物质、TNF-a因子活性以及瘦素含量、瘦素mRNA和蛋白质的分布及表达，进行多层次的综合分析研究。这些研究结果为深入研究酒精性脂肪肝的发病机制提供了科学的、有用的理论研究依据，具有较为重要的理论研究意义和医疗实践价值，也将在药物治疗方面提供一个新的思路。
瘦素;酒精性脂肪肝;免疫组化法;半定量PCR;动物模型;药物治疗
安徽农业大学
硕士
遗传学
周立人;曹琦
2006
中文
R575.5
49
2007-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）