不同地区苜蓿假盘菌培养性状研究和ISSR分子指纹分析
本文对来自不同地区的7个苜蓿假盘菌(Pseudopezizamedicaginis)进行培养性状的观测和分析，并对其中的6个菌株进行ISSR分子指纹分析，结果表明：
1.通过北京、甘肃、北疆、南疆、山西、内蒙和宁夏7个苜蓿假盘菌菌株的分离培养，进一步确认离心稀释法为分离假盘菌的较理想的方法，孢子弹射法能弹射出单孢但不能形成菌落。
2.通过观测7个菌株的菌落直径和生长速度，发现南疆菌株略有优势但并不与其他菌株表现出显著差异。其中北疆、南疆和内蒙菌株产生子囊孢子，而其余各地均不产生，这可能是因为不同地理来源的菌株在产孢条件上有差异。从方差分析结果来看，内蒙和南疆菌株在子囊盘和子囊孢子大小指标上均表现出一致性；宁夏菌株在菌落直径和菌落形成天数上均落后于其他菌株，他们之间差异达到显著水平。
3.V-8碳酸钙、V-8、V-8碳酸钙苜蓿汁和V-8苜蓿汁4种培养基的比较试验得出，V-8苜蓿汁为苜蓿假盘菌最适宜的培养基。并从菌株日生长速度来看，苜蓿汁主要在生长中期发挥作用。
4.对3种方法提取DNA的纯度进行比较，结果表明：氯化苄法效果最佳，SDS-CTAB法次之，SDS法最差。
5.建立稳定的苜蓿假盘菌ISSR-PCR扩增反应体系和反应程序：2μL10×buffer，dNTP0.2mM，MgCL22.0mM，Primer0.5mM，模板DNA100pg/μL，去离子甲酰胺2.5﹪，DNATaq酶1U，ddH2O12.1μL，共计20μL体系；94℃预变性4min，94℃变性30s，58℃退火45s(-1℃/cycle)，72℃延伸2min，10个循环，94℃变性30s，48℃退火45s，72℃延伸2min，33个循环，72℃延伸5min，25℃保存。
6.ISSR-PCR扩增在苜蓿假盘菌中表现出高度多态性，从44个引物中筛选出22个具有多态性的引物，并得出AC、GAA、AG、GA、CA、CTC、ATG以及CT等2或3碱基的重复序列在苜蓿假盘菌中广泛存在，均是首次得到证明。
7.对苜蓿假盘菌ISSR多态性标记进行聚类分析，当遗传距离为0.52时，将供试菌株分为2类，其中内蒙和南疆菌株之间的亲缘关系最接近；结合各菌株的培养性状可以得出，是否产生子囊孢子和子囊盘大小与ISSR多态性表现出相关性，其余的指标均未表现出相关性。
苜蓿假盘菌;培养性状;ISSR;分子指纹分析;亲缘关系
甘肃农业大学
硕士
草业科学
陈本建;袁庆华
2006
中文
S541
67
2007-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）