猪卵泡抑制素主动免疫对肉羊繁殖性能的影响
采集新鲜的离体猪卵巢，在4℃条件下收集卵泡液。将猪卵泡液于4℃条件下用活性碳处理24h，以充分吸附除去卵泡液中的类固醇激素离心除去活性碳，加入-20C的无水乙醇，使乙醇浓度达到86﹪(V/V)以上，混匀使卵泡液中的蛋白成分充分沉淀，收集管底的沉淀，将所得沉淀溶于20mL0.01mol/L，pH7.0PBS，进行SephadexG-100凝胶过滤层析，层析过程中经核酸蛋白检测仪记录下两个蛋白质峰即峰A、峰B，分别收集两峰的产物，用SDS-聚丙烯酰氨电泳的方法，借助标准蛋白质和猪卵泡液抑制素标准品分析A、B两峰的产物，试验结果表明抑制素主要在A峰内。通过hCG对纯种昆明系封闭群清洁级30日龄性成熟前母鼠卵巢增重抑制法测定过滤层析产物的抑制素活性。试验结果表明峰A有较强的抑制素生物活性，对hCG促卵巢增重的抑制效果显著(P＜0.05)；峰B和猪卵泡液对hCG促卵巢增重没有抑制效果。用A峰的冻干物加入弗氏佐剂制成免疫抗原对肉羊进行三次免疫，其中首免用完全弗氏佐剂，两次加强免疫用不完全弗氏佐剂，本试验设计了1个对照组和3个不同的剂量组分别为1ml剂量组、1.5ml剂量组、2ml剂量组，结果发现，对照组10只羊的血清中未检测出抑制素抗体。在三个不同的剂量组羊中首次免疫10d后除个别试验羊外均可检测到抑制素抗体，但抗体滴度较低，且在二免前首免所产生的抗体水平有所降低。加强免疫后血液中的抗体水平逐渐升高，但1ml剂量组，和1.5ml剂量组抗体水平仍较低，只有2ml剂量组试验羊在两次加强免疫后产生了效价较高的均匀而稳定的抑制素抗体。在首次免疫前各剂量组与试验对照组血清中的FSH浓度差异不显著，在第一次免疫后2ml剂量组的FSH浓度就显著高于对照组，而1ml剂量组和1.5ml剂量组血清中的FSH浓度虽略有升高，但与对照组羊的血清中FSH浓度的差异不显著。经过两次加强免疫以后，试验1和试验2组羊血清中的FSH含量虽然略高于对照组的，但是差异不显著。三次免疫后试验羊经手术方法观察卵巢变化，可见卵巢呈淡粉红色，上面有鲜红色的黄体和透明的卵泡，个别羊卵巢上有白体存在，其中2ml剂量组的黄体数和大于3mm的卵泡数显著高于对照组(P＜0.05)。而1ml和1.5ml剂量组虽略有增加，但经统计分析这两组与对照组差异不显著。肉羊经过用本试验制得的抗原Ⅰ2ml进行首免，再用本试验制得抗原Ⅱ2ml在首免后的第20天和第40天进行两次加强免疫，可以有效的提高肉羊的黄体数和发育卵泡数，从而提高肉羊的繁殖性能。
抑制素;肉羊繁殖;主动免疫;生物活性
河北农业大学
硕士
临床兽医学
李铁拴;刘月琴
2006
中文
S857.2;S813;S826.92
47
2007-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）