高温乳糖酶高产菌株的培育及其产酶研究
本论文对产高温乳糖酶的黑曲霉菌株UCo-3的原生质体形成与再生的最佳条件进行了研究，在最佳条件下用紫外线、60Co-γ射线对其原生质体进行复合诱变处理，得到产高温乳糖酶活力较高的菌株黑曲霉DL116，并对该菌株的培养基和发酵条件及产酶机制进行了研究。
对黑曲霉UCo-3原生质体形成与再生条件进行了研究。对菌龄、酶浓度、酶解温度、酶解时间四因素进行正交试验，确定原生质体形成与再生的最佳条件。结果表明：采用1.5﹪的纤维素酶与0.75﹪的蜗牛酶的混合酶液，菌龄为16h，酶解温度为30℃，酶解时间为3h，用0.6mol/LKCl溶液作稳渗剂，在此条件下原生质体形成数为3.05×106个/mL，再生率为2.04﹪。
对诱变程序与步骤进行了研究，确定了2种诱变剂的辐射剂量、致死率与正突变率的相互关系，确定了对黑曲霉菌株UCo-3的原生质体进行诱变的技术参数：使用功率为18W的紫外灯管，照射距离为30cm，照射时间为4min，60Co-γ射线辐射剂量为500Gy。
对UCo-3菌株进行1次紫外线和2次60Co-γ射线诱变，获得一株产高温乳糖酶的高产黑曲霉突变株DL116。对其进行菌种传代产酶性能试验，结果证明突变株DL116经传代10次，乳糖酶活力稳定在44.37U/mL左右，证明其遗传性能稳定。
通过对高产乳糖酶突变株DL116进行菌落形态观察，足细胞和分生孢子头显微观察发现，突变株菌落形态较原菌株UCo-3略有改变，菌落呈整齐圆形年轮状，菌落背面呈现明显的辐射性皱褶。将突变株编号为AspergillusnigerDL116。
对产高温乳糖酶的高产突变株DL116进行产酶研究，发现果胶对乳糖酶的产生具有明显的诱导作用，可显著提高酶的表达量。
对黑曲霉菌株DL116的发酵条件进行了研究，确定其最佳培养基成分及最佳培养条件。研究了不同碳源、氮源、无机盐、表面活性剂等因素对黑曲霉DL116产酶的影响，发现果胶、豆粕粉、玉米浆、硫酸铵浓度对产酶影响较大，且无机氮源与有机氮源存在一定的协同效应。对果胶、豆粕粉、玉米浆、硫酸铵四因素进行正交试验，确定黑曲霉DL116产酶的最佳培养基成分为果胶2.5﹪，豆粕粉6.0﹪、玉米浆9.0﹪、硫酸铵0.1﹪、K2HPO41.0﹪、Tween-800.3﹪。通过摇瓶发酵试验，确定最佳培养条件为：摇床30℃，200r/min，发酵培养基的起始pH为5.0，接种量为孢子浓度104个/mL，装液量为30mL/250mL，培养8.5d。在此条件下培养，β-半乳糖苷酶酶活力达98.8U/mL。是出发菌株UCo-3的6.07倍。
高温乳糖酶;原生质体;诱变育种;黑曲霉菌株
河北农业大学
硕士
微生物学
贾英民
2006
中文
Q949.327.1
54
2007-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）