人牙髓干细胞体外三维培养的实验观察
牙髓组织属于疏松结缔组织，具有修复和再生能力。牙髓干细胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)是位于牙髓组织的一种成体干细胞，具有多向分化、自我更新和高度增殖能力，有望成为牙齿再生修复组织工程的细胞来源。
本课题围绕组织工程的三要素：即种子细胞、生物支架材料和细胞与材料之间的相互作用，对人牙髓干细胞(humandentalpulpstemcells，hDPSCs)进行分离培养及鉴定，并对北京化工大学研制的组织工程生物支架材料—电纺聚L-乳酸纳米纤维(electrospunPLLAnanofiber)生物相容性进行体外实验研究。首先分离培养hDPSCs，参照骨髓间充质细胞体外多向分化的诱导条件，对hDPSCs进行矿化诱导分化培养和鉴定，然后将分离所得的hDPSCs种植在电纺聚L-乳酸纳米纤维生物支架上，进行细胞与材料复合的体外三维立体培养，扫描电镜观察hDPSCs在材料上的黏附、伸展及生长情况，采用四唑氮盐(MTT)检测材料对细胞增殖的影响；腺病毒载体介导的绿色荧光蛋白(GFP)追踪材料上hDPSCs的生长，为牙齿再生修复组织工程的生物材料和种子细胞的筛选以及后续体内植入研究奠定实验基础。所得结论如下：
1、采用组织块培养法成功分离培养人牙髓细胞，对所得成纤维细胞样细胞进行诱导分化持续培养21天，细胞内ALP检测、矿化结节VonKossa、茜素红染色、DSP免疫组化检测阳性，证实所得细胞含有具备分化潜力和增殖能力的牙髓干细胞(DPSCs)，为组织工程化牙本质牙髓复合体提供了可靠的种子细胞来源。
2、研究结果提示PLLA/HA/MWNTs生物相容性良好，对hDPSCs的生长增殖有明显的促进作用，在组织工程领域有较好的应用前景；扫描电镜结果提示已成功进行hDPSCs体外三维立体培养，为牙齿再生修复的组织工程研究奠定了实验基础。
3、GFP对hDPSCs转染效果较好，流式分析转染率达92﹪，提示可以利用腺病毒载体转染hDPSCs，并可作为hDPSCs体外三维立体培养和体内植入实验的示踪标记来追踪细胞的分化和转归。
组织工程学;电纺聚L-乳酸;纳米纤维;三维支架;牙髓干细胞;绿色荧光蛋白
佳木斯大学
硕士
口腔临床医学
陈湘涛
2006
中文
R329;R78
40
2007-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）