脑缺血损伤后自体神经干细胞增殖及分化的实验研究
目的:研究成年大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后梗死周边皮质部位不同时间神经干细胞(NSC)增殖、分化的变化规律。
方法:雄性Wistar大鼠共61只分为假手术组(5只)、脑缺血后12h组(8只)、脑缺血后24h组(8只)、脑缺血后72h组(8只)、脑缺血后1w组(8只)、脑缺血后2w组(8只)、脑缺血后3w组(8只)、脑缺血后4w组(8只)。采用线栓法制作脑缺血模型。大鼠于不同时间处死，处死前均注射5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU)。以神经上皮干细胞蛋白(Nestin)检测神经干细胞的存在，以5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)分别作为增殖、分化的标志，采用免疫组化(SABC法)及免疫荧光技术动态检测脑缺血损伤后不同时间点以梗死灶为中心的梗死周边皮质的BrdU、Nestin、BrdU+/NSE+、BrdU+/GFAP+阳性细胞的表达变化。
结果:1.TTC染色脑组织梗死灶染成白色，正常组织染成粉红色，两者界限较明显。坏死区位于额顶颞叶及内囊，梗死面积为冠状切面的(27.74±6.35)﹪，均达99﹪可信区限内，高度一致。该模型缺血区域稳定可靠；2.HE染色假手术组脑组织结构正常，各缺血组脑组织结构疏松、紊乱，神经细胞水肿、变性、坏死，仅在4w组见有小胶质细胞增生；3.BrdU阳性细胞数的变化假手术组脑组织皮质可见少量BrdU阳性细胞，而且排列疏松。缺血再灌注组梗死周边皮质BrdU阳性细胞在缺血12h即有少量增加(p＞0.05)，24h明显增加，1w达高峰，2w开始下降，但仍然高于正常水平(p＜0.05)，4w接近正常水平；4.Nestin阳性细胞数的变化假手术组脑组织皮质偶见Nestin阳性细胞，缺血再灌注组梗死周边皮质Nestin阳性细胞在24h开始增加，72h明显增加(p＜0.05)，1w达高峰，2w开始下降，4w接近正常水平；5.BrdU+/NSE+、BrdU+/GFAP细胞数的变化梗死灶周边皮质部位BrdU+/NSE+细胞数在2w开始增加(p＜0.05)，4w达高峰；BrdU+/GFAP+细胞数在脑缺血前后无明显变化。
结论:1.假手术组脑组织皮质中仅存在很少的神经干细胞，脑缺血再灌注损伤后BrdU阳性细胞24h明显增加及24h出现Nestin阳性细胞，且均在缺血损伤后1w达高峰，说明脑缺血再灌注损伤可激发成年大鼠自体神经干细胞原位增殖，自体神经干细胞对脑缺血损伤有一定的反应能力；2.脑缺血再灌注损伤后增殖的神经干细胞大多数分化为神经元，极少数分化为胶质细胞，说明脑缺血再灌注损伤后机体存在着潜在的自我修复功能，而这种修复功能主要是通过神经干细胞参与完成的。
脑缺血;缺血再灌注;神经干细胞;细胞增殖;细胞分化;动物模型
佳木斯大学
硕士
神经病学
盛宝英
2005
中文
R743.31
49
2007-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）