枯草芽孢杆菌和生孢噬纤维菌融合子的构建及其生物学特性研究
本研究将具有淀粉酶和植酸酶酶活等优良特性的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和具有纤维素降解能力的的生孢噬纤维菌(Sporocytophagamyxocoecoides)进行原生质体融合，希望得到具有双亲优良特性于一体的益生菌。通过筛选最终得到一株具有淀粉酶、植酸酶酶活及强烈降解纤维素多功能融合子。研究工作包括以下部分：
1.分离纯化枯草芽孢杆菌，并对其进行生理生化和酶活鉴定。结果获得具植酸酶和淀粉酶酶活的枯草芽孢杆菌BS-1菌株。
2.分别对枯草芽孢杆菌和生孢噬纤维菌进行生长曲线测定，结果显示枯草芽孢杆菌和生孢噬纤维菌对数生长中期分别为6小时和6.5小时。
3.利用单因素试验探讨影响枯草芽孢杆菌和生孢噬纤维菌原生质体形成率和再生率的因素，结果显示：BS-1和SM-1最佳溶菌酶浓度为5mg/ml，6mg/ml；酶解时间为1小时。在这种条件下，BS-1菌株的原生质体形成率和再生率分别为90.28﹪，10.80﹪；SP-1菌株的为78.66﹪和9.70﹪
4.利用热灭活的方法对生孢噬纤维菌原生质体进行灭活处理，结果显示：灭活时间50分钟，灭活温度为60℃。
5.在PEG6000和Ca2+存在下使二者在37℃水浴箱中融合60min。并进行可稳定遗传融合子的筛选合子。在选择培养基上获得87株融合子，连续传代10代，获得一株稳定的融合子。
6.比较亲本及融合子菌落表型，显微形态，生化特性，酶活鉴定，对融合子进行初步鉴定。
7.用DNA琼脂糖电泳方法进一步对融合子进行DNA鉴定，确证初筛结果。
8.对融合子及其亲本的纤维素酶，植酸酶和淀粉酶活性进行测定。结果证明融合子淀粉酶酶活高于其亲本，纤维素酶活和生孢噬纤维菌相当，植酸酶活性略低于枯草芽孢杆菌。
枯草芽孢杆菌;生孢噬纤维菌;原生质体融合;生物学特征
湖南农业大学
硕士
水产养殖
肖克宇
2006
中文
Q939.124;Q813.2
53
2007-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）