醋酸棉酚对猪原代培养黄体细胞凋亡影响的研究
我国是一个产棉大国，棉籽饼粕资源丰富，营养价值高，且价格低廉，日益成为饲料中植物蛋白的重要来源。但棉酚是棉籽饼粕中的主要有毒成分，棉酚的雄性抗生育作用早已被证实，而棉酚对雌性的繁殖毒性作用研究较少，观点不一。为探讨棉酚对母畜的繁殖毒性作用，合理开发利用棉籽饼粕作为畜禽配合饲料，进行了本试验。
试验采用长大杂母猪原代培养黄体细胞为模型，通过MTT法、DNALadder检测和TUNEL法，初步探讨0、0.4、2、10、50μg/mL醋酸棉酚对猪原代培养黄体细胞的凋亡影响以及毒性作用。用机械分离和0.2﹪胶原酶Ⅱ消化相结合的方法分离黄体细胞，0.4﹪台盼兰拒染试验显示其活率在90﹪以上。猪原代培养黄体细胞生长良好，预培养24h进行试验，满足试验要求。MTT检测结果表明：5﹪乙醇溶剂对照组与0μg/mL组比较，无差异性(P＞0.05)，说明5﹪乙醇对猪原代培养黄体细胞的影响可以忽略。处理24h，0.4μg/mL浓度组与溶剂对照组比较，差异显著(P＜0.05)，其它各浓度组差异极显著(P＜0.01)；处理48h，各浓度组与溶剂对照组比较，差异均极显著。两时间段同水平间比较，10μg/mL和50μg/mL组差异极显著；48h两浓度组黄体细胞抑制率分别达60﹪和70﹪。琼脂糖凝胶电泳各组均未检测到DNALadder。TUNEL检测结果表明：各剂量组均有黄体细胞凋亡，凋亡率5﹪～23﹪，随着醋酸棉酚浓度的增加细胞凋亡率也增加。24h和48h各剂量组与溶剂对照组相比，差异均极显著。两时间段同水平间比较，0.4μg/mL和2μg/mL组无差异性；10μg/mL和50μg/mL组差异极显著。猪原代培养黄体细胞试验模型的成功应用，为体外研究黄体的相关试验提供了方法借鉴。醋酸棉酚在低、高剂量下均能抑制猪原代培养黄体细胞的增殖和诱导其凋亡。低剂量下主要通过诱导黄体细胞凋亡，从而抑制细胞增殖；高剂量下除诱导细胞凋亡外，主要对细胞直接造成损伤，产生细胞毒性。这种作用呈剂量相关性；在一定剂量下，有时间依赖关系。鉴于棉酚在低剂量时能诱导黄体细胞凋亡，影响母畜繁殖功能，棉籽饼粕不宜作为母畜配合饲料。
醋酸棉酚;原代培养;黄体细胞;细胞凋亡;胶原酶
湖南农业大学
硕士
临床兽医
袁慧
2006
中文
S858.28
42
2007-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）