棉铃虫滞育激素基因启动子分析
滞育激素(DH)和性信息素合成激活肽(PBAN)是调节昆虫发育和性激素合成的两个重要的神经肽。它们由同一个基因所编码，称为DH-PBAN基因。本研究重点围绕着棉铃虫DH-PBAN基因的启动子的相关的调控元件和可能的转录因子进行了一系列实验。首先构建了不同长度的DH-PBAN基因的启动子连接到luci荧光素酶报告基因上游的报告质粒，瞬时转染进家蚕BmN细胞，测定其启动子的转录活性。结果显示，在棉铃虫DH-PBAN启动子上包含多个调节区域，它们能激活或者抑制DH-PBAN启动子的活性。一个激活区域(-467～-371bp)能激活DH-PBAN启动子的转录，而另一个抑制区域(-965～-534)能抑制其启动子的活性。凝胶阻滞分析显示在棉铃虫咽下神经节的核蛋白中，两个可能的转录因子Har-DHMBP-1和Har-DHMBP-2能特异地结合其激活区。进一步，在棉铃虫DH-PBAN基因的启动子上发现了一个E-box(CAGCTG)调控元件，能与一个核蛋白因子Har-DHMBP-3结合。E-box是bHLH家族转录因子结合的DNA核心元件，推测Har-DHMBP-3可能是bHLH转录因子家族的成员。E-box的缺失将导致DH-PBAN基因的启动子转录活性的下降，可能调节已经定位的激活区。总之，在棉铃虫DH-PBAN基因的启动子上，多个调控元件和转录因子包含在DH-PBAN基因的转录过程。
在棉铃虫DH-PBAN基因的启动子的上游，发现了多个forkhead转录因子结合位点。因此，我们克隆了棉铃虫的forkhead转录因子，forkhead转录因子在家蚕纠胞株BraN中过量表达能够增强棉铃虫DH-PBAN启动子活性。Northernblot表明forkhead转录因子表达在棉铃虫的多种组织。半定量RT-PCR显示forkhead转录因子在滞育个体脑中几乎不表达。在中肠中，滞育和非滞育的个体forkhead的表达趋势几乎相同，都是幼虫期表达量低，到了预蛹和蛹期表达量开始大量增加，这可能与棉铃虫的滞育过程中的一些发育事件相关。
滞育激素;性信息素合成激活肽;转录调控;E-box;转录因子;棉铃虫;基因启动子
中国科学技术大学
硕士
遗传学
徐卫华
2006
中文
Q963
54
2007-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）