树突状细胞疫苗影响hu-PBL-SCID鼠膀胱癌淋巴结微转移的实验研究
第一部分人膀胱癌细胞株高侵袭性亚群的体外筛选。目的：利用体外模型筛选人侵袭性膀胱癌细胞株T24的高侵袭性亚群，并观察其体外侵袭能力与运动能力的变化。方法：采用改良的Boyden小室侵袭实验方法，在体外经三次，筛选出人侵袭性膀胱癌细胞株T24的高侵袭性亚群，命名为T24-Ⅲ。绘制子代细胞T24-Ⅲ与母代细胞T24的体外生长曲线，用改良的Boyden小室比较这两种细胞的体外侵袭能力与体外运动能力，荧光定量RT-PCR检测两种细胞的MMP-7mRNA表达水平。结论：本实验用改良的Boyden小室侵袭实验成功地筛选出了人侵袭性膀胱癌细胞株T24的高侵袭性亚群T24-Ⅲ，其体外侵袭力与体外趋化性运动能力均强于母代细胞T24；两种细胞的体外侵袭力与体外趋化性运动能力呈正相关；体外培养条件下，二者的MMP7mRNA表达水平无明确差异。
第二部分hu-PBL-SCID鼠膀胱癌模型的建立及其生物学特性观察。目的：建立人外周血淋巴细胞免疫重建的SCID鼠膀胱癌淋巴道转移模型，观察体外筛选获得的人膀胱癌细胞株高侵袭性亚群T24-Ⅲ细胞与其母代细胞T24的体内侵袭与转移情况，并评价该模型用于DCs疫苗干预膀胱癌淋巴结微转移的可行性。方法；经过渗漏筛查的SCID鼠20只，随机分为两组，每组10只，分别为T24-Ⅲ细胞组与T24细胞组，都经腹腔注射兔AntiasialoGM1，再将密度梯度离心法分离的健康人外周血淋巴细胞，以4×107个·只-1的剂量，经腹腔注射，并在小鼠的右后肢大腿内侧皮下，分别注射T24-Ⅲ细胞与T24细胞，3×106个·只-1。于第2周末，每组分别处死2只鼠，于第4、5周末每组各处死4只鼠。处死鼠时，观察鼠的各脏器大体解剖，取外周血、脾脏、瘤体、右侧腹股沟淋巴结、右侧髂血管旁淋巴结+右侧肾门淋巴结。用ELISA法检测小鼠血清中人IgG表达；用流式细胞仪检测外周血与脾脏中CD3+、CD4+、CD8+的细胞；称瘤重，一半瘤体作普通病理检查，另一半用于RT-PCR检测；淋巴结标本分为两组，一组为腹股沟淋巴结、另一组为髂血管旁淋巴结与肾门淋巴结，各组标本一半作普通病理检查，另一半分别用于RT-PCR，定性法检测了人CK20mRNA与人hTERTmRNA的表达，荧光定量法检测了人CK20mRNA与人GAPDHmRNA的表达。结论：T24-Ⅲ细胞的体内侵袭能力与转移能力也强于T24细胞，二者体内MMP-7mRNA表达无明确差异；MMP-7mRNA的表达水平与肿瘤的侵袭范围呈正相关；用健康人外周血淋巴细胞经腹腔注射可以在荷瘤SCID鼠体内成功地进行免疫重建；所建立的hu-PBL-SCID鼠膀胱癌淋巴结转移模型于第5周末出现较高水平的淋巴结微转移。
第三部分树突状细胞疫苗治疗hu-PBL-SCID鼠膀胱癌的实验研究。目的：通过观察全肿瘤细胞抗原致敏的树突状细胞疫苗对hu-PBL-SCID鼠膀胱癌淋巴结微转移的影响，寻求DCs疫苗用于治疗肿瘤微转移、控制肿瘤扩散及延缓转移灶形成的可能性。
方法：经过渗漏筛查的SCID鼠12只，都经腹腔注射兔AntiasialoGM1，用密度梯度离心法分离的健康人外周血淋巴细胞，以4×107个·只-1的剂量，经腹腔注射，并在小鼠的右后肢大腿内侧皮下注射T24-Ⅲ细胞，3×106个·只-1，制成hu-PBL-SCID鼠膀胱癌模型。另取T24-Ⅲ细胞，反复冻融法提取全肿瘤细胞抗原，再次用密度梯度离心法分离的健康人外周血淋巴细胞，在rhGM-CSF1000ng·ml-1、rhIL-420ng·ml-1、rhTNF-α50ng·ml-1及所提取的全肿瘤细胞抗原的作用下诱导并扩增出DCs疫苗，倒置显微镜观察形态，并用流式细胞仪分析表型。将实验鼠随机分为3组，每组4只，于接种T24-Ⅲ细胞的第5周末与第6周末，在hu-PBL-SCID鼠的右侧腹股沟皮下分别注射0.1ml的PBS、未致敏的DCs(1×106·0.1mF1)与DCs疫苗(1×106·0.1ml-1)。于第7周末处死各鼠，用普通病理检查和荧光定量RT-PCR，观察转移灶的形成及淋巴结微转移。结论：初步观察发现，全肿瘤细胞抗原致敏的树突状细胞疫苗对hu-PBL-SCID鼠膀胱癌有降低淋巴结微转移的作用，有望于用于肿瘤病人的微转移治疗。
免疫重建;微转移;膀胱癌;树突状细胞疫苗
山西医科大学
硕士
外科学
米振国;史天良
2006
中文
R737.14;R338.12
54
2007-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）