重组人骨唾液蛋白的纯化与活性研究
稳定地获得BSP是深入研究BSP的重要保证，获得BSP的途径有两条：一是从骨中提取BSP，二是在表达系统中表达重组BSP。本实验室已经成功实现了重组人骨唾液酸蛋白(rhBSP)在毕赤酵母中的融合表达与非融合表达，并制备获得rhBSP单克隆抗体。基于前期工作基础，本文分别应用Ni-NTA亲和层析和免疫亲和层析法纯化融合型与非融合型rhBSP，并对两种rhBSP蛋白初步进行生物活性的对比研究。
融合表达的rhBSP-His6的C端带有6×His纯化标签，能与Ni2+特异性结合，应用固定化金属离子亲和层析(IMAC)法进行纯化研究，SephadexG-25柱脱盐后，rhBSP-His6浓度为0.67mg/ml，纯度在95％以上，回收率70％。
对非融合表达毕赤酵母GS115/pPICZαAN-hbsp进行发酵条件优化，确定最适摇瓶发酵条件如下：以BMGY作为种子培养基，菌体密度OD600为45时，于BMMY中开始诱导表达，甲醇诱导剂量为1.5％(v/v)，pH值6.0，诱导2d，rhBSP产量达到高峰期，最大表达量为0.128mg/ml。
利用rhBSP单克隆抗体与Aldehyde-ResinHPFF介质偶联，制备免疫亲和柱以纯化非融合型rhBSP，最终制备的非融合rhBSP浓度为0.13mg/ml，纯度在97％以上，回收率63％。
研究发现两种重组蛋白在SDS-PAGE中都分布于43～66kD之间，具有明显的分子量不均一性。尽管毕赤酵母表达系统和哺乳动物细胞存在不同的糖基化方式，但本文纯化的融合型rhBSP与非融合型rhBSP均具有良好的BSP抗原性及抑制羟基磷灰石晶体生长的活性。
骨唾液酸蛋白;毕赤酵母;酸性糖蛋白;生物活性;融合表达;非融合表达;单克隆抗体;纯化
北京化工大学
硕士
发酵工程
王捷;谭天伟
2006
中文
Q513.2;TQ936
42
2006-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）