浙江汉族人群RHD基因合子型及D变异型分子机理的分析
Rh血型系统是具有重要临床意义的血型系统，该系统的抗原不相容能引起溶血性输血反应、新生儿溶血病(HDN)和自身免疫性溶血性贫血。Rh血型系统常见的抗原有D，C，c，E，e，分别由位于1号染色体上(1p34-36)的两个高度同源且紧密连锁的RHD和RHCE基因编码。根据个体红细胞上D抗原的有无，可分为RhD阳性和RhD阴性。
在RHD基因两侧各有一段约9000bp的侧翼序列片段，称为Rh盒子(Rhesusbox)序列。其中5'端为上游Rh盒子(UpstreamRhesusbox)，3'端为下游Rh盒子(DownstreamRhesusbox)。上、下游Rh盒子方向相同，与RHD基因一致，这两个Rhesus盒序列同源性高达98.6％。白种人中绝大多数RhD阴性个体RHD基因上、下游Rhesus盒间触发不等交换，断裂后产生了一个新的杂交Rhesus盒(hybridRhesusbox)。杂交Rhesus盒包含RHD基因上游Rh盒的5'端和下游Rh盒的3'端，上、下游盒间的RHD基因完全缺失。
早期主要根据Rh表型、RHD基因的半定量、RHD相邻基因的有无等推算RHD基因的杂合性。Rh盒发现后，先后有作者报道了PCR-RFLP方法、突变阻滞检测系统(ARMS)和实时PCR技术、PCR-SSP技术等测定RHD基因合子型。个体RHD基因合子型对于预防新生儿溶血病和预测胎儿RhD表型具有重要意义。对于RhD阴性孕妇，当胎儿父亲为RHD+/RHD+型纯合子，则胎儿100％为RhD阳性；当父亲为RHD+/RHD-型杂合子，则胎儿有50％可能性为RhD阴性。
为了探讨浙江汉族人群RHD基因合子型的多态性情况，研究D变异型的分子机理，检测RhD阴性个体1227G＞A突变和RhD阴性个体及D变异型个体中845G＞A突变。我们采用PCR-SSP方法扩增RHD基因上、下游盒和杂交盒，根据个体盒子的检测结果推测其合子型，扩增D变异型RHD基因特异的外显子及其侧翼序列，PCR产物直接序列分析测定核苷酸的变异，并采用PCR-SSP方法检测1227G＞A和845G＞A突变。
结果显示：RHD-/RHD-型纯合子只检出杂交盒，无上、下游盒，RHD+/RHD-型杂合子能同时检出上、下游盒和杂交盒，RHD+/RHD+型纯合子只检出上、下游盒，无杂交盒。198例RhD阳性样本中，12例(6.06％)为RHD+/RHD-型，其余186例(93.94％)为RHD+/RHD+型。32例D变异型样本中，29例(90.63％)为RHD+/RHD-型，3例(9.37％)为RHD+/RHD+型；208例RhD阴性样本中，53例(25.48％)为RHD+/RHD-型，145例(69.71％)为RHD-/RHD-型，10例(4.81％)为RHD+/RHD+型。用RHD基因测序方法对19例D变异型样本进行测序分析，发现9例弱D表型中5例为845G＞A突变，3例为1227G＞A突变，1例为1013T＞C突变。10例部分D表型中Dva(Kou)、Dva(Hus)和DVa-like(YH)各1例，DVItypeⅢ表型7例。208例RhD阴性样本中，共检出39例(18.75％)1227G＞A突变和2例(0.96％)845G＞A突变；32例D变异型样本中共检出12例(37.5％)845G＞A突变。
结论：本实验发现浙江汉族人群中RhD阳性、D变异型、RhD阴性表型个体RHD基因合子型分布频率不同，RhD阴性样本中存在大量的RHD+/RHD-杂合子和RHD+/RHD+纯合子，这表明RhD阴性人群中存在部分缺失RHD基因或有完整RHD基因的情况。本实验所建立的RHD基因测序方法可以用于弱D和部分D的分子鉴定，9例弱D表型和10例部分D表型的分子机理得到明确。其中DVa(Kou)、DVa-like(YH)表型为国内首次报道。
RHD基因;Rh盒子;RHD基因合子型;PCR-SSP技术;Rh血型系统;溶血性贫血
浙江大学
硕士
临床检验诊断学
严力行
2006
中文
R446.1;R556.6
51
2006-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）