猫棒束孢菌抗真菌多肽和巨大口蘑抗真菌蛋白的分离纯化及特性的研究
猫棒束孢菌是本实验室在栽培滑菇的过程中分离出来的一株污染菌，在PDA平板上它对棉花立枯病菌等多种植物病原真菌有明显的抑制作用。通过对其抗真菌活性物质的分离纯化，结构鉴定以其寻找一种全新的抗真菌物质。采用乙醇提取、YPR-Ⅱ大孔吸附树脂吸附、乙酸乙酯萃取、石油醚沉淀和重结晶的方法从I.felina菌丝体中分离纯化出对棉花立枯病菌生长有抑制作用的无色松枝状结晶样品isarfelin。每一步纯化后，其对油菜菌核病菌的抑制活性明显提高。Isarfelin的抗菌谱广，不仅可以抑制多种植物病原真菌的生长，对植物病原细菌桃树根癌病菌K27也有很强的抑制作用，但对一些食用菌菌丝的生长没有影响。Isarfelin不仅对肿瘤细胞株MBL、L1210和hepG2有细胞毒性，而且对HIV-1逆转录酶有抑制作用。Isarfelin在pH4～10范围内活性稳定，热稳定，光不稳定。Isaffelin含有两个组分，分别是分子量为669.4178、分子式为C36H55O7N5的isarfelinA和分子量为655.4028、分子式为C35H53O7N5的isarfelinB，其中isarfelinA占41.2％，isarfelinB占58.8％，二者结构极其相似，仅相差一个CH2。扫描电镜观察isarfelin能引起油菜菌核病菌菌丝生长异常、粗细不均匀、顶端膨大，新分支处菌丝生长受到抑制，但对细胞膜通透性和细胞呼吸作用没有影响。
关于Tricholomagiganteum子实体或菌丝体中生物活性物质已经有报道，通过对其子实体中抗真菌蛋白的分离纯化来丰富具有潜在应用前景的抗真菌蛋白资源。用DEAE-纤维素阴离子交换柱层析、Affi-gel蓝胶亲和柱层析、CM-纤维素阳离子交换柱层析和Superdex75FPLC凝胶过滤，从新鲜巨大口蘑子实体中分离纯化出抗真菌蛋白trichogin。它是一个分子量为27kDa的单亚基蛋白，其N端部分氨基酸顺序为QVHWPMF，与食用菌源抗真菌蛋白Alveolarin、Eryngin和Lyophyllum的N端顺序不同。和其他抗真菌蛋白一样，trichogin不能被DEAE-纤维素阴离子交换层析柱吸附，但能被Affi-gel蓝胶亲和层析柱和CM-纤维素阳离子交换层析柱吸附。Trichogin对植物病原真菌花生褐斑病菌、棉花枯萎病菌和梨轮纹病菌菌丝的生长有抑制作用，对花生褐斑病菌的IC50为3.8±0.28μmol/L。Trichogin还对HIV-1逆转录酶有抑制作用，但没有RNase活性和凝集素的活性。
抗真菌活性;猫棒束孢菌;巨大口蘑;分离纯化;抗真菌蛋白;抗真菌多肽
中国农业大学
博士
微生物学
王贺祥
2005
中文
Q939.96;S432.44
83
2006-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）