油菜抗草甘膦、抗虫基因工程研究
本论文研究的目的是将抗草甘膦、抗虫双价基因(aroA-M12+Bts1m)以及抗草甘膦基因(aroA-M1)通过农杆菌介导等方法导入到油菜优良品种湘油15号、湘油14号和Y03-211中，获得抗草甘膦以及抗草甘膦、抗虫双抗油菜转基因株系。为培育拥有我国自主知识产权的转基因油菜品种奠定基础。同时，利用超声波处理花粉的方法，研究以花粉作为媒介进行油菜基因转化的可能性。
我国是世界油菜生产大国。种植面积和总产均居世界之首。然而虫害和草害是影响产量的重要因素。采用植物基因工程的手段，选育抗草甘膦，以及抗草甘瞵、抗虫双抗油菜新品系将是解决生产上虫害、草害问题的简便、有效的途径。
本文首先建立了油菜高效组织培养体系，在此基础上建立了适合于油菜农杆菌介导转化法的高效转化体系。采用农杆菌介导转化法，将aroA-M1基因，aroA-M12+Bts1m双价基因分别转入到油菜细胞中，通过诱导培养和草甘膦筛选，获得转基因再生植株。对转基因再生植株进行了Southernblot，Westernblot分析，以及抗虫、抗草甘膦鉴定，结果表明：aroA-M1基因，aroA-M12+Bts1m双价基因确已通过农杆菌介导法转入并整合到油菜基因组中。通过对转基因植株进行生物抗性鉴定，在转aroA-M12+Bts1m双价基因的71个转化植株中，共得到16个高抗虫、抗草甘膦的双抗转基因植株。在转aroA-M1基因的72个转基因植株中共得到20个高抗草甘膦的转基因植株。对转aroA-M1基因的T1代进行草甘膦抗性鉴定、PCR、RT-PCR分析的结果表明：外源基因在转基因植株中能够稳定遗传，并且T1代的遗传表现符合孟德尔遗传规律。
本文还利用超声波处理花粉，并辅以人工授粉的方法，将aroA-M1基因导入到油菜品系中。对转基因T1代植株进行草甘膦筛选、PCR检测、Westernblot分析的结果证明，外源基因确已通过超声波处理后的花粉转入到受体植物中。
通过本文的研究还证明：aroA-M1基因和aroA-M12基因在油菜转化中不仅可以用作目的基因选育抗除草剂品种，而且可以代替卡那霉素等抗生素用作植物遗传转化的筛选剂。
双抗油菜新品系;基因转化;抗草甘膦;抗虫双价基因
中山大学
博士
遗传学
徐培林
2005
中文
S565.403.2;S565.4;S503.4;Q753
160
2006-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）