SARS-CoV蛋白质的抗体谱及双抗原夹心ELISA检测抗体方法的研究
严重急性呼吸综合征(SARS)在全球范围内对公共卫生和经济建设构成了严重威胁，其病原体为SARS冠状病毒(SARS-CoV)。了解人体对该病毒各种蛋白质的特异性抗体谱有助于发展基因工程疫苗和诊断方法。在本研究中，我们研究了人体内SARS-CoV蛋白质的抗体谱，探讨了主要抗体的中和活性，并建立和评价了一个检测SARS-CoV抗体的基于重组N蛋白的双抗原夹心ELISA方法。
1.SARS-CoV蛋白质的抗体谱及抗体中和活性
在大肠杆菌中克隆、表达了涉及SARS-CoV4种结构蛋白(S、E、M和N)和5种预测未鉴定蛋白(3a、3b、6、7a和9b)的13种重组蛋白质，将它们纯化后点在醛基化玻片上制备蛋白质芯片，用于筛查SARS患者血清中的特异性抗体、监测SARS患者不同病程血清中抗体的变化规律。结果在恢复期SARS患者血清中检出了针对蛋白S、3a、N、9b的抗体，但未检出针对蛋白E、M、3b、6和7a的抗体。在可检出的4种抗体中以抗N和抗S为主，它们可在SARS患者血清中一直持续到30周以上，第30周时的平均荧光强度约为第4周时的一半。此外，在用重组蛋白S3(aa241～591)、N(全长)、3a(aa125～274)和9b(全长)免疫兔所制备的抗血清中，只有抗S3的多克隆抗体对SARS-CoV感染VeroE6细胞具有中和活性，中和抗体滴度为1：708。结果显示，抗N和抗S抗体可作为SARS-CoV感染的诊断指标，细菌表达的蛋白S3和N可作为候选诊断抗原，S3还可作为发展亚单位疫苗的潜在候选蛋白；血清学证据提示SARS-CoV可能含有2种独特的未鉴定蛋白3a和9b。
2.双抗原夹心ELISA检测SARS-CoV抗体
在SARS-CoVN蛋白不同区域抗原性分析的基础上，利用蛋白质芯片分析技术所筛选出的重组N蛋白，建立双抗原夹心ELISA方法。用N蛋白片段N13(aa221～422)作包被抗原时特异性高于用全长N蛋白，基于N13的双抗原夹心ELISA敏感性和特异性均高于基于全病毒裂解液的间接ELISA。用新建方法分析280份临床诊断SARS患者的血清，在发病21天后SARS-CoV抗体检出率大于91％、35天后达到100％。结果表明，所建立的双抗原夹心ELISA方法具有安全、经济、敏感和特异等优点，适用于SARS的血清学诊断和流行病学研究。
重组蛋白;蛋白质芯片;中和抗体;严重急性呼吸综合征;冠状病毒;抗原;ELISA检测
解放军军事医学科学院;中国人民解放军军事医学科学院
博士后
微生物学
杨瑞馥
2004
中文
R392.11
46
2006-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）