中国孤雌生殖卤虫胚胎发育相关基因的研究
卤虫(Artemia)属于甲壳纲(Crustasea)，鳃足亚纲(Branchiopoda)，无甲目(Anostacea)，卤虫科(Artemidae)，卤虫属(Artemia)，通常分布于内陆盐湖和海岸盐田中。本研究采用mRNA差异显示方法分离中国孤雌生殖卤虫早期胚胎发育相关基因。以发育0h、4h、8h、12h、16h和10d的中国孤雌生殖卤虫的总RNA为模板，用Oligod(T)13M(M分别为A、C、G)3种锚定引物和26种随机引物组合进行DDRT-PCR，经6％非变性PAGE凝胶电泳后，用硝酸银染色显示差异条带，共得到286条胚胎发育相关差异DNA片段，片段长度250-2000bp左右。对其中24条差异片段进行克隆测序，测序结果通过GenBank/EMBL/DDBJ/进行BLAST检索分析。结果发现Seq1、Seq2片断与已知基因有较高的同源性，其余片段与已知基因同源性较低。其中Seq1序列与编码罗非鱼的肌酸激酶基因有较高的同源性，517个碱基中有482个碱基是相同的，同源性达到了92％，Score=747，E=0。用BLASTX进一步比对表明：Seq1序列与罗非鱼的肌酸激酶有很高的同源性，部分序列同源性达到了88％，Score=300，E=3e-80。分离胶显示该基因在孤雌生殖卤虫胚胎发育至16h、10d时表达量增多。RT-PCR和测序结果进一步证明在卤虫胚胎发育至16h和10d时Seq1基因确实存在。Seq1为编码中国孤雌生殖卤虫肌酸激酶基因的一部分，该基因与中国孤雌生殖卤虫早期胚胎发育有着密切的关系。Seq2BLAST分析表明与线虫丝氨酰tRNA合成酶有较高的同源性，100个氨基酸中有55个是相同的，Score=113，E=2e-24。Seq1和Seq2在胚胎发育中的具体作用还有待于进一步研究。其它同源性较低的片段可能为未知新基因，对这些序列信息进行进一步研究将有助于获得完整基因和了解中国孤雌生殖卤虫早期胚胎发育的机制。
中国孤雌生殖卤虫;胚胎发育;mRNA差异显示;卤虫;无甲目;海洋生物学;基因研究
辽宁师范大学
硕士
海洋生物学
侯林
2005
中文
Q959.223.12;Q132.7
65
2006-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）