沙田柚花粉管特异蛋白质的免疫细胞化学研究
本研究应用免疫胶体金标记抗体技术检测了沙田柚开花期的花粉粒和自花授粉后3d1/2花柱中的花粉管识别蛋白及S1-核酸酶的定位分布；探讨了沙田柚花粉离体(invitro)萌发的优化条件；分析了花粉管中的S-蛋白和S1-核酸酶的来源及转运过程，为沙田柚配子体自交不亲和识别蛋白的定位研究提供了一些新的实验证据。为分离、鉴定沙田柚中的S-基因产物打下了基础。
实验结果显示，沙田柚离体萌发的最佳培养基配方为：15％蔗糖，0.02％硫酸镁,0.01％硝酸钾，0.03％硝酸钙，0.01％硼酸,20％PEG6000,PH5.6。
以沙田柚花粉管S-蛋白为一抗的免疫金标结果显示，自交花柱中的花粉管S-蛋白主要分布于内质网、细胞质和细胞纤维外壁上，在花粉粒方面，主要集中分布在花粉内外壁上，尤其是在花粉粒萌发孔及萌发孔附近。用正常兔血清和PBS代替一抗的切片，结果均呈阴性，说明上述免疫金标记为可靠的特异性标记。对于花粉管中S蛋白到底是在花粉管生长过程中形成的还是在花粉萌发过程中从花粉粒获得的这个问题至今未能解决。
实验表明开花期花粉粒中有S-蛋白分布，花粉管中S蛋白是在花粉萌发过程中从花粉粒获得的，这些S蛋白是在花粉粒萌发前停留于萌发孔附近，待花粉萌发后进入花粉管，在花粉管生长过程中参与识别反应。沙田柚花粉体外萌发抑制生长试验已经表明，沙田柚识别蛋白高效表达是在授粉后2～3d，用荧光显微镜观察显示，沙田柚花粉管停止生长于授粉后第3d的花柱1/2处，自交花柱免疫酶标和金标结果显示，自花授粉后2～3dS-蛋白由内质网合成，经外排作用，穿过质膜，定位于纤维壁上。
以S1-RNase为一抗的免疫金标结果显示，S1-RNase在花粉粒和花粉管中的分布和S-蛋白在花粉粒和花粉管中的分布十分相似。
沙田柚;花粉管;S-蛋白;自交花柱;免疫金标;免疫细胞化学;胶体金标记
广西师范大学
硕士
野生动植物保护与利用
秦新民
2005
中文
Q949.9;S58;Q26
49
2006-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）