番茄高频再生系统的建立及果聚糖果糖基转移酶基因转化研究
本研究以番茄(Lycopercicon esculentum Mill)栽培品种贵妃和碧娇为试材,建立了体外繁殖无性系,比较了不同因素对番茄子叶、下胚轴、叶片和茎段外植体再生能力的影响,并对影响外植体转化的因素进行了探讨.利用农杆菌LBA4404(pTSB)介导转化,获得了碧娇转果聚糖果糖基转移酶(fructan fructosyl transferase)基因植株,转化植株在Km50mg/L生根培养基中生根良好,Southern杂交呈阳性,证明目的基因已经整合到碧娇基因组中.抗冻实验、叶片电导率测定、多糖含量测定等实验结果均证实果聚糖果糖基转移酶基因在番茄转化植株中已实现表达.本研究主要进展如下:1.通过分别诱导子叶、下胚轴、叶片和茎段外植体直接分芽,建立了番茄品种贵妃和碧娇的体外无性繁殖的高频再生系统,其平均再生频率均可达95％以上.2.在再生培养基中添加抗坏血酸(Vc)可以有效防止叶片和茎段切口的褐化现象,但添加浓度过高,会使外植体的再生能力降低.最适宜的抗坏血酸添加浓度为50-100mg/L.3.在再生培养基中添加一定浓度的AgNO<,3>能促进外植体的再生和分化,并能有效促进不定芽的伸长生长.有效促进叶片外植体再生的AgNO<,3>添加浓度为1mg/L,茎段外植体为3mg/L.4.将LBA4404(pTSB)对贵妃和碧娇两个品种的转化频率进行比较,碧娇的转化频率明显高于贵妃,抗性愈伤组织诱导率为15.50％.碧娇转化的外植体再生出完整植株,转化植株在添加Km50mg/L的生根培养基中生根良好.5.Southern分析证明果聚糖果糖基转移酶基因(FFT)已整合到碧娇基因组上.6.进行试管苗抗冻实验,-5℃时转化植株和未转化植株的生长状况表现出较大差异,转化植株的抗冻能力提高.7.对植株的叶片进行电导率测定,在一定低温范围内,转化植株的电导率要明显低于未转化植株,转化植株表现出较强的抗冻能力.8.表型分析可见,转化植株在一定低温范围内表现出抗冻能力强于未转化植株,而且可以正常生长和繁殖.9.通过提取番茄叶片、茎和果实的多糖,可知转化植株的多糖含量要高于未转化植株.
番茄;再生;果聚糖果糖基转移酶;基因转化
辽宁师范大学
硕士
植物学
王关林
2001
中文
S641.2;Q943.2
59
2005-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）