人绒毛膜促性腺激素α亚基cDNA克隆、表达及纯化
目的:从人绒毛膜组织中克隆人绒毛膜促进腺激素α亚基(HCGα)cDNA,构建表达载体并进行了表达、纯化,为进一步研究HCGα在多种肿瘤及异常妊娠中的作用及为后续以噬菌体抗体库技术生产HCGα单克隆抗体作前期准备.方法:提取新鲜人绒毛膜组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增出HCGαcDNA,克隆于表达载体PGEX4T-1,酶切鉴定后测序,测序证实序列正确,并转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达融合蛋白GST-HCGα,并通过改变培养条件诱导表达蛋白改变表达形式.超声破菌后上清经谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析纯化,沉淀包涵体经变性、透析复性等处理,用SDS-PAGE电泳、Western印迹分析产物.结论:该实验成功地从人绒毛膜组织中克隆出HCGαcDNA,克隆基因在大肠杆菌中获得了较高水平的表达,表达产物有较好的免疫特异.
人绒毛膜促性腺激素α亚基;克隆;大肠杆菌;表达;纯化
苏州大学
硕士
病原生物学
诸葛洪祥;徐培君
2004
中文
R335.5
44
2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）