弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗免疫效果研究及弓形虫ROP2-P30基因工程复合抗原的构建
该课题基于该室与复旦大学生化与分子生物学实验室共同研制成功弓形虫P30乳酸球菌(Lactococcus lactis/P30)口服疫苗基础上的延伸工作,在研究的第一部分对弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗的实际免疫效果进行考察,第二部分利用基因工程手段构建弓形虫ROP2-P30复合抗原.目的:1.课题研究的第一部分观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗(L.lactis /P30)的免疫效果.首先确定L.lactis /P30免疫小鼠产生免疫保护性的适宜剂量,在此剂量下考查L.lactis /P30口服免疫在小鼠体内诱导的体液免疫反应,以及产生的保护性效果,进一步伐L.lactis /P30口服免疫诱导小鼠产生的细胞免疫效果和抗体IgG的动态发生过程,最后观察L.lactis /P30口服免疫鼠血清中,细胞因子IFN-γ、IL-2及NO分子的变化情况.2.该研究课题的第二部分致力于弓形虫病复合型疫苗的研制,以进一步提高弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗的免疫保护性效果.从弓形虫RH株总DNA中分别克隆棒状体蛋白ROP2和表面膜蛋白P30基因片段,联合克隆至表达载体pET28b中,构建重组质粒pET28b-ROP2-P30,导入大肠杆菌中表达,分析表达的重组蛋白ROP2-P30的免疫活性,为弓形虫病复合型疫苗的研制做准备.结论:1.(1)确定了3×10<'9> CFU的免疫剂量,用此剂量,小鼠的保护性效果则比其他剂量组有所提高;(2)L.lactis/ P30口服疫苗一定程度上刺激小鼠产生了相应的抗体,诱导产生了偏向Th1型的免疫反应,且在小鼠体内发挥了部分保护作用;(3)L.lactis/ P30口服疫苗有效地激发了小鼠细胞免疫反应,特异性抗体IgG在免疫结束一个月后生成明显;(4)L.lactis/ P30口服疫苗有效地刺激了小鼠细胞因子IFN-γ和IL-2的产生,NO分子的释放.2.(1)克隆到的弓形虫棒状体蛋白ROP2在大肠杆菌中得到了表达,分子量为45kDa;(2)弓形虫棒状体蛋白ROP2和主要表面膜蛋白P30融合基因克隆成功,表达出分子量约为69kDa的融合蛋白ROP2-P30,且该重组蛋白具有与天然蛋白相同的抗原表位;(3)复性后的重组融合蛋白ROP2-P30获得了正确的空间构象,具有天然蛋白抗原的免疫活性,可用于开展弓形虫病复合型疫苗的研制工作.
弓形虫;P30乳酸球菌;棒状体蛋白ROP2;ROP2-P30融合表达
苏州大学
博士
病原生物学
陆惠民
2004
中文
R382.5;R392-33
106
2005-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）