盐胁迫下紫杆柽柳cDNA文库构建及表达序列标签（EST）分析
柽柳抗旱、耐盐能力强,因此是进行耐盐碱机理研究的良好材料,但目前,有关柽柳耐盐碱的分子机理研究国内外尚未见报道.该文为了研究柽柳的耐盐机理构建了0.4 mmol/L NaHCO<,3>胁迫处理的柽柳cDNA文库,随机选取重组克隆测序,用表达序列标签(EST)方法研究NaHCO<,3>胁迫下柽柳基因的表达.cDNA初始文库滴度为1.2×10<'6>pfu/mL,蓝白斑检验结果表明,文库重组率为96﹪,PCR检测表明插入片段的平均长度1 200bp左右.随机挑选文库中的克隆进行测序.将获得序列去除5′端载体序列、文库接头序列和poly(A)序列.共获得2328条读序较好的序列.以获得的2 328条序列建立该地核酸数据库.该地BLAST获得642个与其它序列无同源区的序列,其余的1 686条序列依照同源性聚为281个序列集,对每个序列集通过序列联配获得359个contig.用于网上进行BLAST分析的独立序列共有1001个.文库的冗余度为57﹪.1001个序列的BLASTX分析表明,有428个与已知功能的基因序列相似,234个与未知功能的基因相似,339个未能发现相似序列.将428个代表独立已知功能基因的EST,按功能分为11个类,其中防御基因、新陈代谢和蛋白合成及分拣的表达丰度最高,分别为25.26﹪、20.65﹪和15.37﹪.对与耐盐有关基因EST分析结果表明,信号元件、转录调控、应激蛋白和活性氧清除剂所包含的表达的基因比较多,这些基因的表达丰度也较高,分别为4.1﹪、1.9﹪、3.3﹪和0.9﹪,这说明这四种过程在柽柳抗盐胁迫时起到了重要作用.此外,跨膜运输及质子平衡、蛋白质代谢和新陈代谢类所包含的表达的基因种类相对较少,但是其表达丰度也较高分别为0.9﹪、0.9﹪和2.3﹪,可能在盐胁迫中也起到了重要的作用.以上研究说明,柽柳的抗盐过程是一个复杂的多基因协同作用体系,涉及到防御反应、基因调控、信号传导、离子转运、活性氧清除、渗透调节、应激反应等多方面的综合作用,从而为系统阐明柽柳抗盐分子机理研究奠定坚实基础.
树柳;盐胁迫;基因;表达序列标签
东北林业大学
硕士
林木遗传育种
姜静;王玉成
2004
中文
S792.120.2
63
2005-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）