北山羊体细胞异种克隆技术的研究
该实验对北山羊异种体细胞核移植进行了研究.先后对比了山羊卵巢运输温度,成熟液中的激素比例以及成熟时间对山羊卵母细胞成熟的影响;探讨了不同激活方法对山羊卵母细胞的孤雌激活的影响;并用北山羊和山羊耳部成纤维细胞进行了建系,及核型分析和生长曲线测定;测定了不同生长状态的北山羊和山羊成纤维细胞的细胞周期;探讨了山羊新鲜卵丘细胞和培养冷冻后解冻的颗粒细胞作为核供体对山羊核移植效率的影响,电脉冲参数对重构胚发育的影响,以及血清饥饿与完全汇合培养的北山羊和山羊成纤维细胞对重构胚发育的影响;并对异种重构胚进行了胚胎移植.实验得出以下结论:1、山羊卵巢运输温度以20~35℃为佳;成熟液中以FSH8μg/ml,LH0.6IU/ml成熟率较高;而随着山羊卵母细胞成熟时间延长,其成熟率提高,但去核率下降.2、电激活结合化学激活可以更好的激活山羊IVM卵母细胞;在化学激活液中添加CB,卵裂率与对照组相比差异显著(P<0.05),但囊胚率差异不显著.3、组织块培养法对于原代细胞的培养要优于酶消化法;山羊和北山羊的染色体均为60条,且均为端着丝粒染色体;所建北山羊和山羊成纤维细胞系开始生长缓慢、后期生长接触抑制,属于正常细胞;北山羊细胞较山羊细胞生长慢,群体倍增时间分别为:4.46d,2.51d.4、新鲜山羊卵丘细胞重构胚的融合率与培养颗粒细胞组差显著(p<0.05),但卵裂率及桑囊胚率差异不显著.颗粒细胞作为核供体融合率和卵裂率均显著高于成纤维细胞,但桑囊胚率差异不显著.汇合培养与饥饿培养的细胞作为核供体在融合率、卵裂率、桑囊胚率上差异均不显著(p>0.05).5、体外培养第9代北山羊成纤维细胞和第6代山羊成纤维细胞,生长至50％~60％、70％~85％和完全汇合时细胞周期分布存在明显差异.而血清饥饿和完全汇合处理细胞,细胞周期分布无显著差异,即采用异种克隆北山羊时可以用生长完全汇合的方法代替血清饥饿处理来得到G0/G1期细胞.6、核移植325枚异种重构胚,融合率为33.2％.70枚卵裂重构胚移植于14只受体羊,有两只妊娠(14.3％),但都于75d时流产.该实验结果说明,异种核移植技术可以尝试作为珍稀动物北山羊保护的一种新方法.
北山羊;山羊;异种核移植;细胞周期
新疆农业大学
博士
草业科学
郭志勤
2004
中文
S827.3
130
2005-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）