雏鹅新型病毒性肠炎病原的研究及其PCR检测技术的建立与应用
雏鹅新型病毒性肠炎(gosling new type viral enteritis,GNTVE)是新近出现的一种在流行病学、临床症状和病理变化方面与小鹅瘟(gosling plague,GP)极其相似的传染病,它的出现给养鹅业造成了严重的经济损失.因此,准确弄清该病的病原、建立一种能快速作出诊断且能与GP相鉴别的方法、探索有效的防制办法及研制相应的产品是当务之急.采用不同宿主系统对具有GNTVE典型特征的6份临床病料进行了病毒分离的研究.结果发现鹅胚成纤维细胞(geese embryo fibroblast,GEF)是用于GNTVE病原分离的最佳宿主系统,分离成功率达100％(6/6);应用蚀斑克隆技术从其中的一分离物中纯化了7株禽腺病毒(fowl adenovirus,FAV).利用Ⅰ群禽腺病毒Hexon基因在各血清型中比较保守的特点,设计了两对引物并首次成功克隆了广西分离毒株FAV-GX1和四川分离毒株FAV-SCY的580个核苷酸的Hexon基因片段,经过核苷酸序列测定和与其它FAV参考毒株的分析比较,确定FAV-GX1和FAV-SCY均属于Ⅰ群FAV;通过Fiber、ITR基因序列的分析等,进一步确定分离毒株FAV-GX1和FAV-SCY均属于禽腺病毒血清Ⅰ型(FAV-1).根据获得的FAV-GX1和FAV-SCY的基因序列以及发表的小鹅瘟(gosling plague virus,GPV)基因组的序列特征,分别设计了各自的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)引物并建立了能同时检测两种病毒的二重PCR方法;应用该方法对来自广西各地的32份健康雏鹅肝样品、70份健康种鹅泄殖腔拭子样品、33份具有GNTVE典型病变的临床病例的肝样品分别进行检测,结果发现具有GNTVE典型病变患鹅的肝组织中则100%(33/33)同时检测到GPV和FAV-1两种病毒,种鹅的泄殖腔的检出率分别为44.29%(31/70)和37.14%(26/70),健康雏鹅肝样品中检测不到病毒的存在.应用增殖的FAV-GX1和GPV制备了二联灭活油乳剂疫苗.用该灭活油乳剂疫苗分别在种鹅群开产前进行了2次免疫来提高母源抗体和对健康成鹅进行4次免疫来制备了抗GPV和FAV-1的高免血清.动物保护试验和田间应用试验的结果均表明,制备的高免血清和用灭活油乳剂苗免疫种鹅均能给雏鹅提供很好的被动保护.研究的结果表明,GNTVE是一种临床综合征,其病原包括GPV和FAV-1两种病毒;GEF是用于病原分离的优良宿主系统;建立的二重PCR方法可用于该病征的快速诊断;研制的灭活油乳剂苗和高免血清能很好地对该病征进行预防.
雏鹅新型病毒性肠炎;禽腺病毒;禽腺病毒血清Ⅰ型;小鹅瘟;PCR诊断;高免血清
广西大学
硕士
预防兽医学
韦平;李康然
2004
中文
S858.33
48
2004-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）