猪瘟病毒SM株单克隆抗体的制备、初步鉴定及应用研究
该研究采用单克隆抗体技术,用纯化的猪瘟病毒石门毒株(CSFV-SM)免疫BALB/C小鼠,取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,经筛选克隆后,获得了10株能够稳定分泌抗CSFV的单克隆抗体(Monoclonal antibody,McAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为2F<,4>、2F<,7>、2E<,10>、2B<,2>、4G<,5>H<,2>、5F<,11>、5C<,9>B<,1>、4A<,1>C<,9>、3C<,4>、5H<,11>.间接ELISA测定杂交瘤细胞培养上清和接种小鼠腹腔制备的腹水McAb效价,分别在1:160~1:640之间和1:800~1:6400之间;在-80℃超低温下保存3个月后复苏的各杂交瘤细胞仍然能稳定分泌抗CSFV的McAb.免疫荧光(IF)试验对McAb的特异性检测结果表明,2F<,7>、2E<,10>、2B<,2>、4G<,5>H<,2>、5F<,11>、5C<,9>B<,1>、4A<,1>C<,9>与接种CSFV-SM毒的细胞能产生特异荧光,尤以4G<,5>H<,2>株最强,效价高达1:1000;McAb与CSFV E2蛋白反应结果表明,2E<,10>、2B<,2>、4G<,5>H<,2>、2F<,7>是抗E2蛋白的McAb.McAb与SDS处理前后的CSFV-SM抗原均有反应,推测McAb针对的抗原表位可能是线性表位.利用4G<,5>H<,2> McAb对接种CSFV-SM株、梧州株、博白株、北海株和疫苗株病毒的PK<,15>细胞进行免疫酶试验,结果均呈阳性反应.表明该McAb能识别CSFV强毒、野毒和弱毒等病毒株抗原;用4G<,5>H<,2> McAb包被酶标板建立了抗原捕获ELISA(ACI-ELISA)方法,对22份来自不同地区的组织病料进行了检测,结果15份为阳性,与PCR检测的阳性结果(13份)基本一致.这表明ACI-ELISA以其操作简便、能多个样品同时检测、特异性较高等优点在临床上有较大的应用前景.
猪瘟病毒-SM株;细胞融合;单克隆抗体;免疫荧光(IF);抗原捕获-ELISA
广西大学
硕士
预防兽医学
陆芹章;罗廷荣
2004
中文
S852.651
46
2004-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）