广西猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子生物学研究
近来,广西一些养殖场频繁发生以母猪流产、死胎、木乃伊、仔猪呼吸道症状等为特征的流行性传染病,怀疑为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)所致.该研究应用针对PRRSV的N基因的特异性引物P1/P2,通过RT-PCR技术对从广西南宁市郊区收集的仔猪病料进行检测,结果为阳性.将材料接种于易感细胞—Marc-145细胞,经过6代盲传,结果出现了典型的细胞病理变化(CPE),与对照株病变相似,经鉴定为PRRSV,成功地分离出广西第一株PRRSV毒株,命名为GXA株,其毒价为10<'5.33>TCID<,50>/ml.参考VR-2332和CH-1a株基因序列,设计了3对引物E1/E2、M1/M2、N1/N2,分别扩增GXA株的E、M、N基因.并进行克隆和测序.结果分别扩增出大小为668bp、582bp和443bp的目的片段.应用DNAstar生物学软件对所测得的序列进行处理后,得到GXA株的E、M和N基因ORF全长分别为603nt、524nt和372nt,分别编码200、1 74和123个氨基酸.将此3个基因序列分别与国内外已发表的ATCC VR-2332、MLV、BJ-4和LV等1 3个毒株相应基因序列进行了同源性比较.将GXA株的E、M、N基因从重组质粒pMD-E、pMD-M、pMD-N中亚克隆至原核表达载体PET-32a上,构建了原核表达重组质粒PET-E、PET-M和PET-N,并通过酶切鉴定,证实构建成功.
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV);分离;GXA株;克隆;测序;同源性;原核表达重组质粒
广西大学
硕士
预防兽医学
余克伦;黄伟坚
2004
中文
S858.28
67
2004-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）