花生白藜芦醇合酶基因表达载体构建及黄瓜遗传转化体系的初步研究
芪合酶(STS)基因分为两类:白藜芦醇合酶(RS)基因、银松素合酶(PS)基因.该文阐述了RS基因、PS基因研究进展,特别对落花生属、葡萄属、松属等植物克隆的芪合酶基因数目、结构、同源性进行比较和分类,分析芪合酶基因的表达、调控、诱导特性;对芪合酶的转基因烟草、水稻、小麦、苜蓿等特征、效应进行讨论.为了对白藜芦醇合酶功能进一步研究,该实验将构建转化双子叶植物的表达载体.研究中使用的花生RS基因已克隆在载体pUCRSH1与pUCRSH2中,分别以pBI与pBI121为表达载体,构建了两个含RS基因的植物表达载体.分别选择合适的限制性内切酶,对表达载体和含RS基因的克隆载体进行酶切,回收片段并纯化,在T4 DNA连接酶的作用下,进行连接、转化,得到重组菌.通过PCR,酶切和序列测定等方式对重组质粒进行检测.构建两个重组表达载体为pBI-RS、pBI121-RS.提取重组质粒,用冻融法把重组质粒转入农杆菌LBA4404的感受态细胞中,经过筛选培养,用mini-Ti质粒提取方法提取农杆菌质粒,经过PCR检测,确定含RS基因的重组表达质粒已经转入农杆菌中.通过黄瓜离体再生体系的研究,对可能的影响因素:黄瓜的消毒、外植体选择、生长调节剂、不定芽的分化和抗性筛选等方面进行探索,建立了高效、便捷的离体再生体系.用含重组质粒pBI-RS、pBI121-RS的农杆菌LBA4404侵染双子叶植物黄瓜的外植体,进行黄瓜转基因的初步研究.
白藜芦醇合酶基因;构建;表达载体;黄瓜;再生体系;转化
福建师范大学
硕士
植物学
陈由强;朱锦懋
2004
中文
Q946.5;S642.2;S601
74
2004-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）