HBV-TR重组腺病毒载体的构建及其在小鼠肝脏的表达
为进一步研究HBV-TR基因在体内的表达,以及为该基因在乙型肝炎小动物模型体内的抗病毒功能研究和临床应用研究奠定基础,该课题首先构建了HBV-TR重组腺病毒载体,在HEK293细胞中大量扩增至一定滴度后感染正常小鼠,然后用免疫组织化学的方法研究该重组腺病毒在正常小鼠体内,特别是肝脏的表达状况及其毒性反应.该研究使用AdMax Kit D系统完成HBV-TR重组腺病毒载体的构建.首先是构建穿梭质粒(shuttle plasmid),BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切pcDNA3.1(-)/TR得到TR基因片段,同时用BglⅡ和HindⅢ双酶切质粒载体pDC316,然后用T4 DNA连接酶将TR基因片段插入质粒载体pDC316,从而得到穿梭质粒pDC316/TR.使用相同的方法构建对照组穿梭质粒pDC316/TRm、pDC316/hEDN和pDC316/HBc.该课题成功构建了乙型肝炎病毒靶向核糖核酸酶基因的重组腺病毒载体AdTR及其对照载体AdTRm、AdhEDN、AdHBc和空的重组腺病毒载体,并扩增获得了高滴度的AdTR和AdhEDN重组腺病毒颗粒;分别感染正常小鼠后在其肝脏获得了TR融合蛋白和hEDN蛋白的阳性表达.实验证明,使用人腺病毒载体将目的基因导入小鼠肝细胞的基因治疗方法是高效的、可行的.该研究的结果为HBV-TR重组腺病毒载体下一步在乙型肝炎小动物模型体内的抗病毒作用研究,以及为探索新的乙型肝炎基因治疗方法打下了良好的基础.
乙型肝炎病毒;靶向核糖核酸酶;腺病毒载体;免疫组织化学;基因治疗
第四军医大学
硕士
病原生物学
薛采芳
2004
中文
R512.62
45
2004-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）