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封面
北京化工大学学位论文原创性声明
中文摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章文献综述
1.1甜味蛋白的研究进展
1.1.1甜昧剂发展的简介
1.1.2甜味剂的种类
1.1.3几种甜昧蛋白的研究现状
1.1.4基因工程技术在甜味蛋白研究中的应用
1.2巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展
1.2.1巴斯德毕赤酵母表达系统简介
1.2.2表达载体的发展
1.2.3受体菌的发展
1.2.4外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中高效表达的策略
1.2.5总结和展望
1.3论文的新颖性
第二章植物甜蛋白(Brazzein)重组菌株的构建
2.1序列的设计及研究思路
2.1.1基因序列的设计
2.1.2研究思路
2.2材料和试验方法
2.2.1材料
2.2.2试验方法
2.2.3结果与讨论
本章小结
第三章目的蛋白的诱导表达与分析
3.1试验材料
3.1.1试剂
3.1.2仪器设备
3.2试验方法
3.2.1植物甜蛋白(Brazzein)在高拷贝的菌株中的诱导表达
3.2.2Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳
3.3结果与讨论
本章小结
第四章发酵条件的优化
4.1试验材料
4.1.1菌种
4.1.2试剂
4.1.3主要仪器设备
4.2试验和测定方法
4.2.1细胞干湿重与OD600值关系的测定
4.2.2基础盐的原始配方
4.2.3底物中甘油浓度的测定
4.2.4发酵液总蛋白的测定
4.2.5发酵条件的优化
4.2.6 Brazzei n的小试发酵
4.3结果与讨论
4.3.1细胞干湿重与OD600值的关系
4.3.2甘油的消耗
4.3.3发酵条件的优化
4.3.4 Brazzei n的小试发酵
本章小结
第五章目标蛋白的初步分离
5.1实验材料
5.1.1试剂
5.1.2仪器
5.2实验方法
5.2.1沉淀法
5.2.2.树脂吸附法
本章小结
第六章结论
6.1实验进展
6.2存在的问题
6.3原因和解决办法
参考文献
附录一培养基
附录二缓冲液
附录三离子交换柱特征表
附录四Sephadex G50层析图谱
附录五SephadexG25层析图谱
附录六树脂SP-FF层析图谱
致谢
攻读硕士学位期间发表文章

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DOI:10.7666/d.Y602173

利用毕赤酵母发酵表达植物甜蛋白(Brazzein)的初步研究

赵红玲

北京化工大学

引用

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摘要：

该文研究的植物甜蛋白(Brazzein)是甜味蛋白中分子量较小的一员,仅为6.4kD,由54个氨基酸残基组成,它的相对甜度是蔗糖的2000倍,而且具有良好的热稳定性.已有人成功的利用大肠杆菌和转基因植物实现了表达.毕赤酵母是一种可以以甲醇为唯一碳源的非常规酵母,具有强有力的AOX启动子,可将外源基因整合到宿主的染色体上,继代十分稳定,蛋白可以分泌表达,实现高密度发酵,因此毕赤酵母是一种高效蛋白表达体系.该文采用巴斯德毕赤酵母(Pichiapastori)GS115作为宿主菌进行了表达植物甜蛋白(Brazzein)的初步研究.

关键词：Brazzein;巴斯德毕赤酵母;基因重组;分泌表达;分离纯化

授予单位：北京化工大学

授予学位：硕士

学科专业：生物化工

导师姓名：陈劲春

学位年度：2004

语种：中文

分类号：TQ93

页数：81

在线出版日期：2004-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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