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北京化工大学学位论文原创性声明
引言
1文献综述
1.1蛋白质化学修饰
1.1.1化学修饰的意义
1.1.2蛋白质化学修饰基本思路
1.1.3化学修饰对蛋白质性质的影响
1.1.4常见的蛋白质化学修饰方法
1.1.5蛋白质化学修饰的展望
1.2聚乙二醇偶联
1.2.1 PEG的性质
1.2.2 PEG在生化药物化学修饰中的应用
1.2.3聚乙二醇的活化
1.2.4 PEG修饰蛋白的产物分析
1.3人粒细胞集落刺激因子简介
1.3.1 G-CSF的分子结构和基因
1.3.2 G-CSF的生物学作用
1.3.3 G-CSF的临床用途
2聚乙二醇修饰粒细胞集落刺激因子的修饰条件优化
2.1材料与方法
2.1.1实验材料与设备
2.1.2羧甲基化单甲氧基聚乙二醇的制备及活化
2.1.3 PEG活化率的测定
2.1.4偶联物的制备
2.1.5修饰条件优化
2.1.6蛋白质浓度测定
2.1.7蛋白质氨基修饰度的测定
2.1.8生物活性测定
2.2结果与讨论
2.2.1活化度测定标准曲线及结果
2.2.2正交试验结果
2.2.3不同因素对产物平均修饰度和生物活性的影响
2.3本章小结
3聚乙二醇修饰粒细胞集落刺激因子的修饰产物分离纯化
3.1材料和方法
3.1.1实验材料与设备
3.1.2 PEG修饰G-CSF
3.1.3蛋白质浓度的测定
3.1.4修饰产物分离纯化
3.1.5偶联物的SDS-PAGE电泳鉴定
3.1.6偶联物的生物活性鉴定
3.2 结果与讨论
3.2.1修饰产物分离纯化色谱图
3.2.2 SDS-PAGE电泳鉴定各收集峰
3.2.3各收集峰的生物活性鉴定
3.3 本章小结
4聚乙二醇修饰粒细胞集落刺激因子的产物分析
4.1材料和方法
4.1.1实验材料与设备
4.1.2荧光胺法测定蛋白修饰度
4.1.3 TNBS法测定蛋白修饰度
4.1.4 SDS-PAGE电泳
4.1.5 MALDI-TOF MS测定分子量
4.2结果与讨论
4.2.1不同方法测定修饰度结果比较
4.2.2 MALDI-TOF MS图谱
4.3本章小结
5 PEG-G-CSFS偶联物的稳定性
5.1材料与方法
5.1.1实验材料与设备
5.1.2 PEG-G-CSF偶联物的热稳定性
5.1.3 PEG-G-CSF偶联物的抗胰酶水解能力
5.1.4 PEG-G-CSF偶联物的保存稳定性
5.2结果与讨论
5.2.1热稳定性
5.2.2抗胰酶水解能力
5.2.3 PEG-G-CSF偶联物的保存稳定性
5.3本章小结
6结论与展望
6.1研究总结
6.2 工作展望
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢

DOI:10.7666/d.Y602170

聚乙二醇化学修饰重组人粒细胞集落刺激因子技术研究

杨瑞娥

北京化工大学

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引用

摘要：

用化学修饰方法对蛋白质进行改造具有重要的生物医学意义,可以延长蛋白质药物的循环半衰期,提高药效,降低副作用.其中蛋白质的聚乙二醇修饰技术具有较大优越性.该文以琥珀酰亚胺基单甲氧基聚乙二醇羧甲酯(SCM-mPEG)为修饰剂,以重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)为目标蛋白对聚乙二醇修饰蛋白质技术进行了较为系统的研究.

关键词：聚乙二醇;化学修饰;粒细胞集落刺激因子

授予单位：北京化工大学

授予学位：硕士

学科专业：生物化工

导师姓名：苏志国;谭天伟

学位年度：2004

语种：中文

分类号：TQ93

页数：70

在线出版日期：2004-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）