EGDE交联血红蛋白制备红细胞代用品
研究将乙二醇二缩水甘油醚(EGDE)作为蛋白质交联剂,用来交联血红蛋白(Hb),制备红细胞代用品.探索了这一交联反应的可行性,优化了交联条件.该文还发展了一种活性基团干扰法,间接测定出EGDE在pH7.5下,主要作用基团为血红蛋白的巯基,在pH8.7和9.5的条件下,主要作用基团为血红蛋白的氨基.采用SDS-PAGE电泳、高效液相色谱和多角度激光散射联用法检测交联反应结果.实验表明,不同的反应条件下可得到不同的反应产物,在35℃、pH8.7、较低的血红蛋白浓度(20mg/ml)和相对较高的修饰剂比例(摩尔比EGDE:Hb=100:1)下反应4小时,主要产物为分子内部亚基之间交联的血红蛋白,且分子内交联血红蛋白相对总蛋白含量90％以上;在pH7.5、较高的血红蛋白浓度(200mg/ml)和相对较低的修饰剂比例(摩尔比EGDE:Hb=25:1)下反应12小时,主要产物为分子间交联寡聚血红蛋白,分子量范围在140-380KD之间,其中二聚体血红蛋白占总蛋白量的74.7％,三聚体血红蛋白18.9％,四到六聚血红蛋白6.4％,几乎无高聚物生成,是红细胞代用品的最佳分子量.小鼠的安全性实验表明产品无毒性,论证了其作为红细胞代用品的生物安全性.进一步研究了EGDE分子内交联血红蛋白和分子间交联寡聚血红蛋白各种性质,包括携氧特性、等电点、交联特性、全波长扫描分析、蛋白质二级结构分析等,探讨了其作为红细胞代用品的可行性.
乙二醇二缩水甘油醚;血红蛋白;交联;红细胞代用品
北京化工大学
硕士
生物化工
苏志国;谭天伟
2004
中文
TQ93
82
2004-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）