日本血吸虫病免疫学诊断方法改进的研究
目前血吸虫病仍是一个严重的公共卫生问题.在中国其分布于8个省的211个县,大约有近694,788的感染者.血吸虫病的免疫学诊断,目前主要以血清学检查为主,但血清标本的采集具损伤性,如以唾液标本来替代血清标本,则可避免以上缺点.该实验研究了唾液作为日本血吸虫病诊断与筛查标本的可行性.良好的诊断抗原是保证抗体检测特异性与敏感性的关键,为此我们对诊断抗原也进行了改进研究.我们用SDS-PAGE技术结合免疫印迹技术对SEA和AWA的不同分子量组份进行了分析,并对有疗效考核潜能的抗原分子进行了提纯和鉴定.动物实验证明针对日本血吸虫成虫抗原中60 kDa片段的抗体在治疗后消失较快,在治疗后3周即降至正常水平,具疗效考核的潜能.通过基因工程方法制备抗原,所获抗原纯度高,可以大量生产.不仅可以解决大量诊断抗原的来源,而且利于检测方法的标准化.该实验中我们根据日本血吸虫Sj16基因和Sj50的基因序列设计了二对引物,以PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库中扩增了Sj16基因和Sj50基因;将它们克隆入原核表达载体pGEX4T-1,成功构建了重组质粒pGEX4T-1-Sj50和pGEX4T-1-Sj16.将重组质粒分别转化入大肠杆茵BL21后,IPTG诱导表达了分子量约为80 kDa的融合蛋白GST-Sj50和分子量约为50 kDa的融合蛋白GST-Sj16.融合蛋白经Glutathione Sepharose4B纯化,凝血酶(thrombin)酶切去除GST后获纯化的Sj50(50kDa)和Sj16(16 kDa)蛋白.分别以Sj50和Sj16作为诊断抗原,用ELISA检测感染兔与日本血吸虫病人血清中的特异性抗体.
日本血吸虫;免疫学诊断;唾液;组份抗原;重组抗原
上海交通大学医学院;上海交通大学;上海第二医科大学
硕士
病原生物学
薛纯良
2002
中文
R532.21
54
2004-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）