簇毛麦染色体分子标记的筛选及其高分子量谷蛋白亚基基因的克隆
1.以普通小麦中国春、中国春-簇毛麦二体附加系以及不同来源的簇毛麦为材料,用100个10碱基随机引物进行RAPD扩增.2.在对OPF02<,750>进行克隆、测序后,获得一个757bp的DNA片OPF02<,757>.将由该片段推导的氨基酸序列送入Genbank进行氨基酸同源性查询,发现它与水稻的许多反传录转座子的氨基酸序列具有较高的同源性,因此推测OPF02<,757>与簇毛麦的反传录转座子有关.利用OPF02<,757>序列设计一对PCR引物,建立了簇毛麦染色体组特特异性PCR标记.3.选用位于普通小麦1A、1B、1D染色体上的32对微卫星引物对普通小麦中国春、簇毛麦、6个中国春-簇毛麦二体附加系和1个普通小麦-簇毛麦二体代换系进行SSR分析,发现引物Xgwm498在簇毛麦中扩增出2条长分别为110bp和190bp的片段（即Xgwm498/110和Xgwm498/190）,这两个片段仅在簇毛麦、中国春-簇毛麦1Ha附加系中出现,其余2Ha、4Ha、5Ha、6Ha、7Ha附加系、3V代换系和中国春中都缺少这两个片段.进一步研究表明,这两个片段与簇毛麦的居群无关.因此,Xgwm498/110和Xgwm498/190为簇毛麦1V染色体所特有,可以用来快速跟踪导入普通小麦背景中的簇毛麦的1V染色体.4.利用SDS-PAGE技术,对中国春、钱尼、簇毛麦、6个中国春-簇毛麦二体附加系、普通小麦-簇毛麦3V异代换系、进行HMW谷蛋白的亚基组成分析,进一步确定簇毛麦HMW谷蛋白编码基因位于1V染色体.5.从三个不同来源的簇毛麦中克隆了1Va、1Vb、1Vc等三个簇毛麦高分子量谷蛋白亚基编码基因.6.根据所克隆的三个簇毛麦HMW-GS基因的核苷酸序列和已发表的普通小麦HMW-GS基因的核苷酸序列,经过同源性比较后设计了两对簇毛麦HMW-GS编码基因的特异性引物.
簇毛麦;分子标记;编码基因;HMW-GS基因;PCR扩增;1V染色体
中国农业大学
博士
作物遗传育种
刘广田
2002
中文
S512.032
128
2004-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）