人endostatin基因在Pichia pastoris中的整合、表达及活性
利用Pichia pastoris酵母整合型质粒pPICZaA-endo将人endostatin基因整合于Pichia pastoris酵母细胞染色体中,该质粒具有酿酒酵母a因子的信号肽、zeocin的抗性基因.实验过程是将质粒线性化后,电转化Pichia pastoris甲醇酵母,质粒转入细胞后,质粒上AOX1基因的5'启动子序列和3'转录终止子序列能与宿主细胞染色体发生同源重组,在发生单交换时,使整个质粒插入到宿主染色体中.通过含zeocin抗性平板上的克隆、筛选、PCR鉴定和用甲醇诱导表达,筛选出一株能在Pichia pastoris中高效表达人endostatin基因的工程菌,经发酵检测,证实发酵后的工程菌产量为50mg/L.再经heparin柱亲和层析纯化,纯化的样品进行CAM方法活性检测,结果表明,所表达的rhEndostatin有很强的抑制鸡胚新生血管生成的能力.
甲醇酵母;基因表达;endostatin基因;Pichia pastoris
内蒙古大学
硕士
微生物学
李充壁
2002
中文
Q784
25
2004-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）