重组人参多肽的研究
人参多肽（ginsengpeptide）由14个氨基酸组成，是一种极具潜力的降血糖药物.首先，将pBluescript-gsp经限制型内切酶HindⅢ和NotⅠ酶切后与经同样酶切处理的pPIC9连接，形成重组质粒pPIC9-gsp.把pPIC9-gsp用BglⅡ酶切线性化后电穿孔转化入巴斯德毕赤酵母GS115.经筛选得到his<'+>Mut<'s>表型的阳性克隆.小规律地培养重组菌株后进行目的蛋白的诱导表达，用Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳分析诱导液.目的蛋白是含有59个氨基酸，分子量为5.9kD的小肽.经酶切和凝胶电泳分析验证了分泌蛋白的正确性.通过对诱导培养基中氮源的优化，目的蛋白的表达量由345mg/l提高到750mg/l.此外，批次发酵的研究表明重组菌株可用于重复5次连续发酵生产目的蛋白.通过该研究，构建了结构正确的重组质粒pPIC9-gsp，筛选出了阳性克隆菌株，探索了目的蛋白的诱导表达与分析过程中的相关技术手段.并对发酵优化及相关方面做出了初探.
人参多肽;巴斯德毕赤酵母;基因重组;诱导表达
北京化工大学
硕士
生物化工
陈劲春
2002
中文
Q556.3
53
2004-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）