重组人肿瘤坏死因子α（rhTNFα）的鉴定、表达及大规模提取的研究
该论文是该实验室用大肠杆菌表达重组人肿瘤坏死因子的中试生产工艺的一部分.论文重点对重组人肿瘤坏死因子的基因鉴定、克隆表达，目标蛋白的释放和初提取进行了研究.由于该实验室的E.ColiBL21菌种保存时间过长，需要对质粒进行鉴定.首先提取pTNF320质粒，切下其中的TNFcDNA片段，插入到克隆载体pUC19上测序，根据测序结果翻译到氨基酸序列，同文献中的TNF氨基酸序列进行了比较，两者序列完全一致，表明此工程菌可用，然后将pTNF320质粒转化新鲜的宿主菌E.ColiBL21进行目标产物的表达.另外，该实验针对珠磨破碎动力学进行了研究，分别考察了间歇破碎、连续破碎动力学，研究了蛋白释放率与细胞破碎之间的关系，比较了连续破碎、间歇破碎及超声破碎的的破碎效果.论文还研究了高流量多循环对细胞破效果的影响，考察了不同操作条件下的能量利用率.最后根据TNF的耐温特性，集成60℃热变性除杂蛋白及随后的硫铵沉淀，考察了不同组合集成路线对TNF初提取的影响，得出了一条最佳工艺路线.
肿瘤坏死因子;基因鉴定;细胞破碎;初提取
北京化工大学
硕士
生物化工
马润宇;苏志国
2002
中文
R730.2
81
2004-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）