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摘要
英文摘要
缩略词
1 前言
1．1研究目的及意义
1．2研究方案
2．1．1细胞及培养条件
2．1．2病毒毒株
2．1．3菌株及质粒
2．1．4引物
2．1．5试剂
2．1．6实验溶液配置
2．1．7仪器设备
2．2实验方法
2．2．1质粒构建
2．2．2质粒的提取
2．2．3CRISPR-Cas9构建敲除细胞
2．2．4真核细胞转染
2．2．5肠道病毒扩增
2．2．6肠道病毒感染
2．2．7TCID50实验
2．2．8荧光素酶报告实验
2．2．9免疫荧光
2．2．10免疫共沉淀
2．2．11 Western Blot
2．2．13荧光定量PCR
2．2．14EV-A71体外转录实验
2．2．15RNA pull down实验
2．2．16统计学分析方法
3实验结果
3．1EV-A71和EV-D68宿主蛋白切割谱的切割筛选
3．1．1肠道病毒感染细胞样品的质控
3．1．2切割蛋白质谱结果的WB验证
3．1．3 EV-A71和EV-D68共切割宿主蛋白谱的通路富集性分析
3．1．4EV-A71和EV-D68共切割宿主蛋白谱的相互作用分析
3．1．5宿主蛋白在EV-A71复制中的作用
3．1．6小结
3．2EV-D68和EV-A71对SFPQ、NONO的切割
3．2．1EV-D68和EV-A71对SFPQ的切割作用
3．2．2EV-D68和EV-A71对NONO的切割作用
3．2．3小结
3．3宿主蛋白SFPQ、NONO在EV-A71复制中的作用
3．3．1敲低SFPQ抑制EV-A71复制
3．3．2敲低NONO抑制EV-A71复制
3．3．3敲除NONO抑制EV-A71复制
3．3．4小结
3．4EV-A71感染诱导SFPQ和NONO出核形成聚集性复合颗粒
3．4．1EV-A71感染诱导SFPQ和NONO出核
3．4．2EV-A71感染早期诱导SFPQ出核
3．4．3EV-A71感染早期诱导NONO出核
3．4．4SFPQ和NONO共定位于EV-A71感染诱导的聚集性颗粒
3．4．5NONO和SFPQ存在相互作用
3．4．6砷剂诱导形成的SGs中不含SFPQ和NONO
3．4．7小结
3．5SFPQ出核促进EV-A71 5’UTR介导的翻译作用
3．5．1SFPQ和NONO与EV-A71 5’UTR存在相互作用
3．5．2Emetine抑制EV-A71 5’UTR介导的翻译作用
3．5．3过表达NONO不影响EV-A71 5’UTR介导的翻译作用
3．5．4SFPQ出核促进EV-A71 5’UTR介导的翻译作用
3．5．5小结
3．6肠道病毒3Cpro切割SFPQ
3．6．1SFPQ／NONO的切割非Caspase途径
3．6．2NONO的切割非2Apro和3Cpro的作用
3．6．3EV-D68和EV-A71的3Cpro切割SFPQ
3．6．4SFPQ的切割关键位点是第113、257位氨基酸谷氨酰胺
3．6．5SFPQ 114-707片段促进EV-A71 5’UTR介导的翻译作用更强
3．6．6小结
3．7神经系统高表达GAD1可以促进EV-D68复制
3．7．1在神经系统中，GAD1含量比GAD2高
3．9GAD1通过提高GABA的水平促进EV-D68的复制
3．10GAD1可以促进毒EV-A71，CV-A16和HRV16的复制
3．11小结
4讨论
5总结
6综述
参考文献
硕士在学期间发表的学术论文
致谢