ω--芋螺毒素MVIIA纳米自组装体的制备及其镇痛效应研究
ω-芋螺毒素MVIIA是海洋芋螺分泌的毒液中所含有的一类活性肽，用于严重慢性疼痛的治疗。齐考诺肽是MVIIA的商品名，在临床上通过鞘内注射缓慢持续给药，给药后多伴随有头晕、恶心呕吐和虚弱无力等不良副反应。多肽纳米自组装体作为一种新型药物剂型，具有缓慢释放性、响应性和稳定性增强等优势。本课题以ω-芋螺毒素MVIIA为模型，对其进行修饰改造，以期能够得到镇痛活性时间延长，毒副作用更低的ω-芋螺毒素MVIIA纳米自组装体。 本课题针对ω-芋螺毒素MVIIA的结构特点及作用机制，以多肽MVIIA序列中的Lys为修饰靶点，以肉豆蔻酸/醛为修饰试剂，以单修饰、双修饰为修饰目标，设计了纳米自组装体。首先，本论文利用固相合成法合成了 ω-芋螺毒素MVIIA以及N末端肉豆蔻酸修饰的MVIIA,命名为Myr-MVIIA。通过还原胺化反应得到了单位点、双位点肉豆蔻醛修饰的MVIIA,并应用二级质谱分析方法对修饰位点进行了鉴定。其中，单位点修饰指的是MVIIA序列中第二位Lys上修饰了肉豆蔻醛，命名为K2-MVIIA。双位点修饰分别指的是MVIIA序列中第二位和第四位Lys上、第二位和第七位Lys上、第二位和第二十四位Lys上修饰了肉豆蔻醛，依次命名为 K2+K4-MVIIA、K2+K7-MVIIA、K2+K24-MVIIA。本论文进一步通过1,8-ANS荧光实验、临界胶束浓度检测、透射电镜TEM以及纳米粒度仪等进行自组装性能的表征，结果表明Myr-MVIIA、K2-MVIIA和K2+K4-MVIIA肽均具有较强的自组装能力，并且均自组装形成了纳米胶束结构。 ω-芋螺毒素MVIIA特异性阻断N型钙通道Cav2.2发挥镇痛作用。故本研究通过电生理膜片钳实验评估了 MVIIA各修饰肽对Cav2.2的体外电生理活性的影响，结果表明Myr-MVIIA、K2-MVIIA和K2+K4-MVIIA对Cav2.2通道仍然有一定的体外钙电流抑制活性，但是相比MVIIA抑制作用有所降低，其中Myr-MVIIA肽对Cav2.2通道电流的抑制作用没有显著变化。因此，本研究进一步通过建立醋酸诱导实验小鼠扭体反应的实验模型对侧脑室给药Myr-MVIIA纳米自组装体后的镇痛效果进行了研究。结果发现给药MVIIA组会引发实验小鼠震颤等严重的副作用，然而，Myr-MVIIA 纳米自组装体给药组在相同甚至更高的给药剂量下均没有观察到任何的运动障碍副反应。由于Myr-MVIIA纳米自组装体能够缓慢释放，因此其镇痛药效持续时间相比MVIIA实验组显著增加，镇痛作用可以持续到给药后10h。 综上所述，本课题构建了ω-芋螺毒素MVIIA的自组装策略与修饰方法，获得了一系列具有自组装能力的MVIIA纳米自组装肽。其中，Myr-MVIIA 纳米自组装体展现出良好的体内、体外镇痛活性，并与MVIIA相比，延长了镇痛作用时间，并显著减少甚至消除了震颤等副作用。本研究将为ω-芋螺毒素MVIIA及相关肽类药物的新剂型开发和高效使用提供有益借鉴。
ω-芋螺毒素;纳米自组装体;制备工艺;镇痛效应
北京化工大学
硕士
生物与医药
陈龙;徐建富
2023
中文
TQ464.7
2023-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）