miR--10401--3p在胃癌细胞中的抑癌作用及机理研究
在中国，胃癌的发病率和死亡率均排在已知癌症类型中的第四位,相比其他国家和地区，胃癌在我国属于易发癌症。由于在胃癌早期没有类似于其他癌症的显著临床症状，因此被确诊胃癌的患者大多数都已处于晚期，导致临床干预很难得到相应的效果。胃癌的发病机理极其复杂，因为每一种胃癌都有特定的发病机理，这也是导致胃癌早期诊断和确诊后治疗相对困难的原因。因此探索胃癌发病机理，确定可以用于临床的早期诊断标志物以及寻找治疗靶点，是目前胃癌治疗的关键点。 MicroRNAs(miRNAs)是长度大约在22nt的单链非编码RNAs(ncRNAs)。前人的研究表明，miRNAs可以靶向癌症相关基因，从而调控癌症进展。因此miRNAs具有成为胃癌早期诊断标志物以及治疗靶点的潜力。 经初步研究发现，miR-10401-3p可能对胃癌有抑制作用。因此我们决定探索miR-10401-3p在胃癌中的抑癌作用及机理，论文具体内容如下: 通过测定21对临床胃癌和癌旁组织中miR-10401-3p的表达情况以及胃上皮细胞系和胃癌细胞系中miR-10401-3p的表达情况发现，与癌旁组织相比，miR-10401-3p在胃癌组织中的表达显著降低，与胃上皮细胞系GSE-1相比,miR-10401-3p在胃癌细胞系AGS和MGC803中的表达显著降低。以胃癌细胞系AGS和MGC803为研究体系，进行伤口愈合、实时无标记细胞分析仪(RTCA)实验、MTT增殖实验以及检测迁移相关基因和蛋白后发现,miR-10401-3p模拟物对胃癌细胞系迁移具有抑制作用且可以抑制基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)家族成员 MMP1、MMP12、MMP14 和上皮-间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)相关基因钙黏蛋白N(N-cadherin,N-cad)的表达，可以促进钙粘蛋白E(E-cadherin,E-cad)的表达。相反的，miR-10401-3p抑制剂可以促进胃癌细胞系迁移能力，但对胃癌细胞系增殖能力没有影响。miR-10401-3p抑制剂可以促进MMP1、MMP12、MMP14以及N-cad基因的表达，可以抑制E-cad基因的表达。miR-10401-3p抑制剂还可以促进波形蛋白(Vimentin,VIM)和N-cad蛋白的表达，抑制E-cad蛋白的表达。 通过生物信息学分析，筛选miR-10401-3p下游靶点，发现miR-10401-3p模拟物可以下调POU2类同源框2(POU class 2 homeobox 2,POU2F2)的表达，miR-10401-3p抑制剂可以上调POU2F2的表达。再经过双荧光素酶报告基因(Luciferase)实验在两种细胞系中确定了 miR-10401-3p可以和POU2F2 mRNA直接结合的具体位点。之后我们又通过伤口愈合以及RTCA等弥补实验进一步证明，miR-10401-3p抑制剂可以弥补敲低POU2F2对于胃癌细胞系迁移能力的抑制作用，miR-10401-3p抑制剂可以弥补敲低POU2F2对于促迁移基因MMP1、MMP12和MMP14的抑制作用。最后，我们发现miR-10401-3p抑制剂可以促进雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)以及信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)蛋白的磷酸化。 本文揭示了 miR-10401-3p在胃癌细胞中的抑癌作用及其机理，并且证明了 miR-10401-3p/POU2F2/mTOR/STAT3轴对于胃癌细胞的调控，为胃癌早期诊断标志物的发现以及miR-10401-3p作为胃癌潜在治疗靶点的研究提供了理论依据。
胃癌;发病机制;非编码小分子RNA-10401-3p;抑癌作用;POU2类同源框2;雷帕霉素靶蛋白;信号转导和转录激活因子3
北京化工大学
硕士
化学工程与技术
王艳东
2023
中文
R735.2;R730.2
2023-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）