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目录
第一章前言
1．1阿拉伯半乳聚糖蛋白(AGP)的研究进展
1．1．1AGPs的分子结构特征
1．1．2AGP与其他多聚糖之间的相互作用
1．1．3AGP的生物合成
1．1．4AGP的生理生化特性
1．1．5AGP的生物学功能
1．2参与AGP合成的糖基转移酶的研究进展
1．2．1β-半乳糖基转移酶(GalTs)
1．2．2β-葡萄糖糖基转移酶
1．2．4阿拉伯呋喃糖糖基转移酶
1．3棉花纤维发育的研究进展
1．3．1棉花纤维的起始期
1．3．2棉花纤维的伸长期
1．3．3初生壁向次生壁的过渡期
1．3．4次生壁的增后期
1．3．5纤维成熟期
1．4立题依据和研究意义
第二章GhGalT1基因的克隆、表达及酶活性分析
2．1实验材料
2．1．1植物材料
2．1．2工具酶及试剂盒
2．1．3培养基
2．1．4常用试剂、缓冲液及提取buffer
2．2实验器材
2．3实验方法
2．3．3棉花GhGalT1基因的组织表达分析
2．3．4GhGalT1-VENUS转基因烟草的获得
2．3．7GhGalT1的酶活性分析
2．4结果
2．4．3GhGalT1基因在棉花不同组织中的表达分析
2．4．4Western blot检测GhGalT1在烟草中的表达
2．4．5反向高效液相色谱(RP-HPLC)测定GhGalT1的酶活
2．4．6质谱(MS)及蛋白组学分析GhGalT1的酶活反应产物
2．5讨论
2．5．2GhGalT1是一个β-1，3-半乳糖基转移酶，能够催化AG糖链中β-1,3-半乳聚糖主链的合成
2．5．3GhGalT1基因可能参与调控棉纤维发育
第三章GhGalT1在棉花纤维发育中的功能分析
3．1．1植物材料
3．1．2工具酶及试剂盒
3．1．3常用试剂、缓冲液及培养基
3．2实验器材
3．3实验方法
3．3．1棉花基因组DNA的提取
3．3．2棉花纤维总RNA的提取
3．3．3Southern杂交
3．3．4体外胚珠培养实验
3．3．5成熟纤维品质测定分析
3．3．6扫描电镜观察纤维起始
3．3．7棉花纤维半薄切片的制备及显微结构观察
3．3．8棉花纤维的免疫组织化学反应
3．3．9棉花纤维中AGP的分离、纯化及定量分析
3．3．10棉花纤维中AGP的Western blot及dot blot
3．3．11棉花纤维中AGP的单糖组分分析
3．3．12棉花纤维中细胞壁单糖组分分析
3．3．13棉花纤维的转录组分析
3．4结果
3．4．1GhGalT1转基因棉花的阳性鉴定
3．4．2GhGalT1转基因棉花植株表型分析
3．4．3扫描电镜分析GhGalT1转基因棉花纤维的起始
3．4．4较低水平的GhGalT1有利于维持正常的棉纤维细胞发育和形态建成
3．4．5GhGalT1参与调控AGPs中AG糖链的合成
3．4．6AGPs单糖组分在GhGalT1转基因株系纤维中发生改变
3．4．7GhGalT1转基因纤维细胞壁单糖组分分析
3．4．8转录组分析
3．4．9GhFLAs与GhGalT1基因共表达
3．5讨论
3．5．2GhGalT1在棉花纤维和拟南芥中可能发挥不同的作用
3．5．3棉花纤维正常的起始和伸长需要适量的AG多聚糖糖链结构
第四章棉花GhGalTs蛋白之间的相互作用研究
4．1实验材料
4．1．1植物材料
4．1．2菌种和质粒
4．1．4酵母转化所用缓冲液及培养基
4．1．5烟草瞬时转化缓冲液
4．2实验方法
4．2．1酵母双杂交实验验证GhGalTs蛋白之间的相互作用
4．2．2双分子荧光互补实验验证GhGalTs蛋白之间的相互作用
4．3实验结果
4．3．1酵母双杂交研究GhGalTs之间的相互作用
4．3．2双分子荧光互补(BiFC)验证GhGalTs之间的相互作用
4．4讨论
第五章棉花Di19蛋白在盐胁迫和ABA信号中的作用机制
5．1前言
5．2实验材料
5．3实验方法
5．3．1拟南芥材料的种植和收获
5．3．2转基因植株与突变体植株的产生
5．3．4转基因拟南芥植株的表型分析
5．3．5GhDil9-1和GhDil9-2蛋白的亚细胞定位分析
5．3．6体外磷酸化实验
5．4结果
5．4．1CDPK在体外以Ca2+依赖方式磷酸化GhDi19-1／-2蛋白
5．4．2Ser位点对于GhDi19-1／-2蛋白正常的亚细胞定位是必需的
5．4．3Ser位点是激活GhDi19-1／-2蛋白应答盐胁迫和ABA信号的关键位点
5．4．4Thr位点不是激活GhDi19-1／-2蛋白应答盐胁迫和ABA信号的关键位点
5．4．5CDPK通过Ser位点磷酸化而功能性激活GhDi19-1／-2
5．5讨论
结论
本论文的主要创新点
参考文献
附录
博士期间撰写和发表的学术论文
致谢