自组装纳米颗粒猪瘟疫苗的构建及评价
猪瘟(Classicalswinefever，CSF)是一种严重危害我国乃至全球养猪业的烈性传染病，是OIE要求需申报的动物疫病之一。CSF的病原体是猪瘟病毒（Classicalswinefevervirus，CSFV），该病毒的基因组长度为12.3kb，编码4个结构蛋白（Core、Erns、E1、E2），其中E2结构蛋白能够诱导机体产生中和性抗体，抵御CSFV强毒的攻击，是CSFV最主要的保护性抗原蛋白，因此是研究猪瘟疫苗的主要靶标蛋白。 铁蛋白(Ferritin，FR)能够形成由24个亚基组成的八面体对称的近乎球形的蛋白颗粒，并且已经被用于疫苗的研究中。以纳米颗粒为骨架展示抗原可以大大提高抗原的密度，刺激机体产生更高的免疫应答水平，因此，可以利用铁蛋白自组装纳米颗粒研发安全、高效的疫苗。 为了研制一株具有标记作用的优秀猪瘟疫苗，本试验利用铁蛋白作为展示平台，将CSFVE2基因与铁蛋白基因串联，并克隆至表达质粒中。将重组表达质粒瞬时转染HEK293细胞，经CSFVE2抗原捕获ELISA检测，证明了重组蛋白成功表达并分泌到上清中。随后，通过Westernblotting试验表明，利用抗His标签单克隆抗体成功检测到FR(FR-SP1和FR-GT6)和FR-E2(FR-E2-SP1和FR-E2-GT6)的表达，同时利用CSFV特异性单克隆抗体WH303进一步证明FR-E2-SP1和FR-E2-GT6成功表达。经负染透射电镜，观测到FR和FR-E2均成功组装成直径大小为10-15nm的纳米颗粒。随后，构建了稳定表达FR-E2纳米颗粒的ExpiCHO悬浮细胞系，经流式细胞分选术，获得阳性细胞系，即为稳定表达FR-E2的ExpiCHO细胞系。接下来，通过间接ELISA方法分析了FR-E2纳米颗粒的抗原性，结果表明FR-E2纳米颗粒与CSFVC株E2蛋白和Shimen株E2蛋白具有相似的抗原性。最后，将Sigma佐剂系统与FR-E2纳米颗粒按1∶1(v/v)的比例接种至小鼠体内，并检测小鼠产生的中和抗体水平。结果表明，FR-E2纳米颗粒具有比E2蛋白更好的免疫原性，能够刺激小鼠产生更高水平的中和抗体。 综上，本试验构建的FR-E2自组装纳米颗粒是一种具有潜力的新型猪瘟疫苗，同时也具有开发作为猪瘟诊断抗原的潜力。
猪瘟疫苗;自组装纳米颗粒;E2结构蛋白;铁蛋白;抗原密度
延边大学
硕士
兽医学
李太元;仇华吉
2018
中文
S859.797
2023-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）