H9N2亚型禽流感病毒神经氨酸酶片段调控miRNA激活树突状细胞免疫功能的研究
禽流感是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病。近两年来，禽流感频繁爆发肆虐全球，给我国乃至世界上许多国家的养禽业造成了极大的经济损失。H9N2亚型禽流感病毒（Avianinfluenzavirus，AIV）是一株低致病性禽流感病毒，具有高度变异性和易与其他亚型流感病毒发生重组等特点，往往会造成毒力增强，甚至跨物种传播造成人际间的流感爆发或大流行。2013年我国爆发的禽流感病毒H7N9亚型和H10N8亚型均是由H9N2病毒与其他亚型流感病毒重组而产生的。因此，寻找有效的抗流感病毒的靶标及药物已迫在眉睫。禽流感病毒的致病性一方面取决于病毒的特征，另一方面取决于宿主免疫应答。树突状细胞(Dendriticcells，DC)是免疫应答过程中最重要的抗原递呈细胞，也是沟通天然免疫和获得性免疫的唯一桥梁，参与抵御流感病毒的复制。miRNA是一类具有调节功能的RNA，广泛参与调控树突状细胞的发育、成熟以及抗原递呈功能等。尤其是，近年的研究发现miRNA参与调控树突状细胞以应对流感病毒的攻击。因此，从miRNA的层面入手去探讨miRNA调控树突状细胞的功能具有重要的理论和实践意义，也为合理的开发新型miRNA药物以及应用miRNA预防禽流感病毒提供了重要的理论依据。 在禽流感病毒中，结构蛋白NA、M和NS在病毒传播中发挥着重要的功能，其中神经氨酸酶(NA)具有切割病毒颗粒与细胞唾液酸的连接以及释放子代病毒的功能。因此本研究从三个结构蛋白(NA、M、NS)入手，首先，构建这三个结构蛋白的真核表达载体，转染树突状细胞，结果显示NA可以显著刺激树突状细胞的MHCⅡ和CD80表型的高表达，表明NA具有刺激树突状细胞的成熟的功能。其次，我们通过荧光定量PCR筛选受上述三个结构蛋白影响的miRNA，结果表明NA能显著上调树突状细胞的miR-155和miR-674(其中miR155上调4.67倍，miR-674上调2.12倍)。再次，针对差异表达的miRNA，本研究通过过表达和干扰的方法分别研究miR-155和miR-674对树突状细胞免疫功能的影响。最后，为了进一步探讨miRNA的可能作用机制，我们通过miRNA靶基因预测软件分别筛选miR-155和miR-674的潜在靶基因，通过双荧光素酶法验证miRNA与靶基因之间的相互作用。试验结果表明，miR-155能够显著降低MYO1D基因的荧光素酶活性，荧光抑制率达到58.2％;而对于miR-674，CAMK1D和MBNL3均能造成荧光素酶活性显著差异，CAMK1D为85.2％、MBNL3甚至达到了90.5％。 综上，本研究成功构建了从NA到miRNA以及其下游靶基因的调控网络(NA-miR155-MYOID,NA-miR674-CAMK1D,NA-miR674-MBNL3)，为揭示miRNA在宿主与病原相互作用中潜在的重要作用奠定基础。
H9N2亚型禽流感病毒;神经氨酸酶;树突状细胞;miRNA;免疫功能
南京农业大学
硕士
生物工程
高国富;张克云
2015
中文
S852.65
2023-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）