灰树花β--葡聚糖结构表征及其抗肿瘤机制初探
灰树花β-葡聚糖（以下简称β-葡聚糖）因其抗肿瘤功效显著，成为医学和保健食品的研究热点之一。 本课题采用高碘酸氧化、Smith降解、气相色谱、高效液相色谱、红外光谱、热重分析等方法，对灰树花的酸提取与碱提取并经纯化的β-葡聚糖进行结构分析，结果得到:两种多糖单糖组成均为D-葡萄糖;在886cm-1处均出现葡萄糖β端基差相异构C-H变角振动吸收峰，即为β-糖苷键构型葡聚糖;相对分子量分别为483114.4Da和641262.6Da;酸提取β-葡聚糖糖苷键为1→4键14.96％，1→6键29.56％，1→2键占比7.42％，1→3键48.06％，碱提取β-葡聚糖糖苷键为1→4键14.9594％，1→6键29.5601％，1→2键占比7.4229％，1→3键48.0574％。 细胞毒性检测发现:β-葡聚糖对L929、Raw264.7和Hepa1-6细胞单独作用无毒性。利用共培养体系进一步研究β-葡聚糖抗肿瘤效果。建立稳定的Raw264.7/Hepa1-6共培养体系:先接种Raw264.7细胞24h后接种Hepa1-6细胞，接种比例为Raw264.7细胞:Hepa1-6细胞接种数量为1∶2。结果发现:培养体系中，三个剂量的β-葡聚糖均能显著性抑制Hepa1-6细胞的增殖，并具浓度依赖性。β-葡聚糖可促进Raw264.7细胞及共培养体系中的TNF-α高表达，在共培养体系尤其显著;当β-葡聚糖作用的共培养培养液作用于Hepa1-6后，TNF-α和IL10逐渐减少，且MTS显示Hepa1-6细胞增殖被抑制，这与β-葡聚糖直接作用于Hepa1-6细胞相比有显著性差异。由此说明TNF-α与Hepa1-6细胞存在相互作用，灰树花β-葡聚糖可通过促TNF-α高表达从而抑制Hepa1-6细胞增殖。 采用PCR和WB检测共培养细胞体系中相关免疫抑制检查点表达水平，结果发现β-葡聚糖可显著下调Raw264.7的SIRPα蛋白水平表达，Raw264.7的SIRPα下调意降低其与肝癌细胞的CD47结合机会减少，提示β-葡聚糖具有降低Hepa1-6与Raw264.7免疫逃逸机会。经β-葡聚糖作用的共培养培养液，分别作用于Hepa1-6和Raw264.7细胞后，移去β-葡聚糖作用，当两种细胞混合培养时Hepa1-6细胞增殖被抑制，由此推测共培养体系中，经β-葡聚糖作用后的Raw264.7将具有“杀伤”记忆。 综上所述，灰树花β-葡聚糖通过减少免疫逃逸在Raw264.7/Hepa1-6细胞模型上具有抗肿瘤效果，但其信号通路仍需进一步探索。
灰树花;β-葡聚糖;结构表征;抗肿瘤机制
闽南师范大学
硕士
化学生物学
潘裕添
2018
中文
R914
2023-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）