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声明
目录
符号说明及缩略词
摘要
英文摘要
第一章研究背景和立题依据
1．1研究背景
1．1．1酯类水解酶简介
1．1．2OsmC蛋白简介
1．1．3含OsmC结构域的新型酯酶的研究进展
1．2立题依据和研究内容
1．2．1立题依据
1．2．2研究内容
第二章双结构域酯酶Est22及其单结构域缺失突变体的生化性质分析
2．1引言
2．2实验材料、试剂、仪器及分析软件
2．2．1实验菌株和质粒
2．2．2培养基
2．2．3主要试剂和试剂盒
2．2．4主要仪器设备
2．2．5数据库及分析软件
2．3实验方法
2．3．1Est22基因的获取及异源表达
2．3．2Est22的分离纯化
2．3．3Est22的酶学性质分析
2．3．4Est22截短突变体的构建及酶活性检测
2．3．5OsmC结构域缺失突变体Est22-258N的酶学性质分析
2．3．6蛋白Est22及其突变体Est22-258N的结晶
2．4结果与分析
2．4．1Est22的序列分析
2．4．2Est22的异源表达及酶学性质分析
2．4．3Est22多个截短突变体的构建及酶活性检测
2．4．4OsmC结构域的缺失对Est22酯酶活性的影响
2．4．5蛋白Est22及其突变体Est22-258N的结晶
2．5讨论
第三章酯酶Est22同源蛋白E45及其截短突变体的生化性质分析
3．1引言
3．2实验材料、试剂、仪器及分析软件
3．2．1实验菌株和质粒
3．2．2培养基
3．2．3主要试剂和试剂盒
3．2．4主要仪器设备
3．2．5数据库及分析软件
3．3实验方法
3．3．1酯酶Est22同源蛋白基因的筛选及异源表达
3．3．2E45的酶学性质分析
3．3．3E45截短突变体的构建及酶活性检测
3．3．4OsmC结构域缺失突变体E45-251N的酶学性质分析
3．4结果与分析
3．4．1酯酶Est22同源蛋白基因的序列筛选及异源表达
3．4．2E45的序列分析
3．4．3E45酶学性质分析
3．4．4多个E45截短突变体的构建及酶活性检测
3．4．5OsmC结构域的缺失对E45酯酶活性的影响
3．5讨论
第四章酯酶E45的晶体结构解析及分析
4．1引言
4．2实验材料、试剂、仪器及分析软件
4．2．1实验菌株和质粒
4．2．2培养基
4．2．3主要试剂和试剂盒
4．2．4主要仪器设备及耗材
4．2．5分析软件
4．3实验方法
4．3．1E45突变体的构建
4．3．2E45和SeMet-E45-L66M的过表达和分离纯化
4．3．3E45和SeMet-E45-L66M蛋白结晶及数据收集
4．3．4E45晶体结构解析
4．4结果与分析
4．4．1酯酶E45蛋白的结晶及晶体结构解析
4．4．2酯酶E45的整体结构分析
4．4．3E45中酯酶结构域的结构分析及其关键活性位点
4．4．4酯酶E45中OsmC的结构分析及其丧失过氧化酶活性的结构基础
4．4．5对OsmC结构域影响E45酯酶活性的结构基础的初步分析
4．5讨论
全文总结与展望
参考文献
致谢